METHOD FOR TESTING A MUTANT GENE THROUGH REAL TIME POLYMERASE CHAIN REACTION USING DNA POLYMERASE WITH INHIBITED ACTIVITY OF 5'-FLAP ENDONUCLEASE

The present invention relates to a method for detecting single nucleotide polymorphism (SNP) using a feature that the 5'-flap endonuclease (FEN) activity of DNA polymerase is inhibited when a probe complementarily binds to the end of a polymerase chain reaction (PCR) product. More specifically, the present invention relates to a novel method wherein it was verified that, when a probe used for a real-time PCR complementarily binds to the end site of a PCR product, the 5'-FEN activity of thermostable DNA polymerase to the probe is inhibited, and thus when such a feature is used to make a design such that an SNP site to be detected is located at the 5'-end site of the probe, the 5'-flap formation is induced according to the allele, thereby allowing effective SNP detection. La présente invention concerne un procédé de détection d'un polymorphisme mononucléotidique (SNP) utilisant une caractéristique en ce que l'activité endonucléase 5'-flap (FEN) de l'ADN polymérase est inhibée lorsqu'une sonde se lie de manière complémentaire à l'extrémité d'un produit de réaction en chaîne de la polymérase (PCR). Plus spécifiquement, la présente invention concerne un nouveau procédé dans lequel il a été vérifié que, lorsqu'une sonde utilisée pour une PCR en temps réel se lie de manière complémentaire au site final d'un produit de PCR, l'activité 5'-FEN de l'ADN polymérase résistante à la chaleur pour la sonde est inhibée, et ainsi lorsqu'une telle caractéristique est utilisée pour réaliser une conception telle qu'un site SNP à détecter soit situé à la terminaison 5' de la sonde, la formation de la 5'-flap est induite selon l'allèle, permettant ainsi la détection efficace du SNP.