RNASE H-BASED ASSAYS UTILIZING MODIFIED RNA MONOMERS
Methods and compositions are provided for improving specificity during amplification of a target DNA sequence. The methods and compositions rely upon the use of an RNase H enzyme, a polymerase, and RNase H enzyme-sensitive, blocked-cleavable oligonucleotide primers in the amplification reactions, wh...
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Format: | Patent |
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Zusammenfassung: | Methods and compositions are provided for improving specificity during amplification of a target DNA sequence. The methods and compositions rely upon the use of an RNase H enzyme, a polymerase, and RNase H enzyme-sensitive, blocked-cleavable oligonucleotide primers in the amplification reactions, wherein the reaction mixtures include either an optimized final concentration of a divalent metal salt comprising 2.0 mM or less of free Mg++ cation and/or an optimized final concentration of a non-ionic detergent comprising at least about 0.001% polyethylene glycol hexadecyl ether.
L'invention concerne des procédés et des compositions pour améliorer la spécificité au cours de l'amplification d'une séquence d'ADN cible. Les procédés et compositions reposent sur l'utilisation d'une enzyme ARNase H, d'une polymérase et des amorces oligonucléotidiques sensibles à l'enzyme ARNase H, bloquées du point de vue du clivage, dans les réactions d'amplification, les mélanges de réaction comprenant soit une concentration finale optimisée d'un sel métallique divalent comprenant 2,0 mM ou moins de cation Mg++ libre et/ou une concentration finale optimisée d'un détergent non ionique comprenant au moins environ 0,001 % d'éther hexadécylique de polyéthylène glycol. |
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