EXPRESSION VECTOR ELEMENT COMBINATIONS, NOVEL PRODUCTION CELL GENERATION METHODS AND THEIR USE FOR THE RECOMBINANT PRODUCTION OF POLYPEPTIDES

Herein is reported that for transient transfections the use of the human elongation factor 1 alpha promoter (with Intron A) provides for an enhanced productivity (in LC-HC-SM organization), the use of the bovine growth hormone polyA signal sequence provides for an enhanced productivity compared to use of the SV40 polyA signal sequence, the addition of the HGT to the bGH PolyA signal sequence results in an increased productivity in vectors containing the hCMV promoter and the vector organization LC(3` -5 ')-HC-SM results in improved expression. For stable pools it is reported that pools generated with vectors containing the hEF1a promoter show an enhanced productivity in batch analysis, clones generated with vectors containing the hEF1a promoter show a reduced number of low producing clones, and clones generated with vectors containing the hEF1a promoter show a higher stability of IgG expression. For single clones it is reported that the vector organization with downstream position of selection marker (LC-HC-SM) has a positive effect on productivity of single clones and that clones generated with vectors containing the bGH polyA signal sequence and the hGT have higher productivities. Selon la présente invention, pour des transfections transitoires, l'utilisation du promoteur alpha du facteur 1 d'élongation humain (avec l'Intron A) permet une productivité accrue (dans l'organisation LC-HC-SM), l'utilisation de la séquence signal polyA de l'hormone de croissance bovine permet une productivité accrue en comparaison à l'utilisation de la séquence signal polyA de SV40, l'addition du HGT à la séquence de signal de polyA de bGH conduit à une productivité accrue dans des vecteurs contenant le promoteur hCMV et l'organisation du vecteur LC(3'-5')-HC-SM conduit à une expression améliorée. Pour des ensembles stables, il est rapporté que des ensembles générés par des vecteurs contenant le promoteur hEF1a présentent une productivité accrue dans une analyse en vrac, des clones générés avec des vecteurs contenant le promoteur hEF1a présentent un nombre réduit de clones faiblement producteurs, et des clones générés avec des vecteurs contenant le promoteur hEF1a présentent une stabilité supérieure de l'expression d'IgG. Pour des clones uniques, il est rapporté que l'organisation du vecteur avec une position en aval d'un marqueur de sélection (LC-HC-SM) a un effet positif sur la productivité de clones isolés et que des clones générés avec des vecteurs contenant la séquence s