PASSAGING AND HARVESTING FORMULATION AND METHOD FOR HUMAN PLURIPOTENT STEM CELLS

Formulations and methods are disclosed for the harvesting and subsequent passaging of human pluripotent stem cells without the use of enzymes and/or scraping to dislodge cells from cell culture vessels. The formulations and methods permit the harvesting of cells as large clusters from the surface of various cell culture vessels including multilayer cell culture vessels. Further, the formulations and methods provide high yields of harvested cells for subsequent passaging and high post-harvest cell viability. Pluripotent stem cells passaged with the formulations according to the methods remain undifferentiated and express typical stem cell markers, while, at the same time, they retain the differentiation capability and are able to differentiate into the cells in all three germ layers and generate teratomas, even after numerous rounds of harvesting and passaging. These hPSCs also maintain normal karyotype after passaged with the formulations for extended period of time. La présente invention concerne des formulations et des procédés permettant la collecte puis le passage de cellules souches pluripotentes humaines sans utiliser d'enzymes et/ou racler les cellules pour les déloger des récipients de culture cellulaire. Les formulations et les procédés permettent de collecter les cellules sous forme d'agrégats volumineux à la surface de divers récipients de culture cellulaire, notamment de récipients de culture cellulaire multicouches. En outre, les formulations et les procédés de l'invention permettent d'obtenir des rendements élevés de cellules collectées pour le passage suivant et une viabilité cellulaire post-collecte élevée. Les cellules souches pluripotentes repiquées avec les formulations selon les procédés demeurent indifférenciées et expriment des marqueurs de cellules souches classiques, tout en conservant leur capacité de différentiation et leur aptitude à se différencier en cellules dans les trois couches du feuillet embryonnaire et produire des tératomes, même après de nombreux cycles de collecte et de passage. Ces cellules souches pluripotentes humaines (hPSC) conservent également un caryotype normal après repiquage avec lesdites formulations pendant une longue période de temps.