métodos de ensaio de ciclização enzimática para homocisteína e cistationina e de teste de amostras contendo homocisteína, bem como kit de teste para quantificar homocisteína e ensaios de avaliação da quantidade de homocisteína

"ensaios de ciclização enzimática para homocisteína e cistationina". a presente invenção refere-se a um ensaio de ciclização enzimática para avaliação da quantidade de homocisteína e/ou cistationina em uma solução tal como sangue, derivados de sangue ou urina. o ensaio compreende as etapas de contato da solução contendo homocisteína e/ou cistationina para formar uma mistura de reação, com cbs, ou um seu derivado, l-serina, e cbl, ou um seu derivado, por um período de tempo suficiente para catalisar a conversão clínica da forma homocisteína em cistationina e a reconversão de cistationina em homocisteína com a produção de piruvato e amônia; determinação da quantidade de homocisteína e/ou amônia presente na mistura de reação; e determinação da quantidade de homocisteína e/ou cistationina presente na solução baseada na quantidade de piruvato e/ou amônia formada. vetores de expressão e procedimentos de isolamento para cbs, ou seus derivados, e cbi, ou seus derivados, são também providos, bem como kits de teste para realizar o ensaio. em modalidades preferidas, os ensaios podem ser realizados em 15 minutos ou menos, com um mínimo de uso de enzima. The present invention provides an enzymatic cycling assay for assessing the amount of homocysteine and/or cystathionine in a solution such as blood, blood derivatives, or urine. The assay comprises the steps of contacting the solution containing homocysteine and/or cystathionine to form a reaction mixture, with CBS, or a derivative thereof, L-serine, and CBL, or a derivative thereof, for a time period sufficient to catalyze the cyclical conversion of homocysteine form to cystathionine and the reconversion of cystathionine to homocysteine with the production of pyruvate and ammonia; determining the amount of homocysteine and/or ammonia present in the reaction mixture; and determining the amount of homocysteine and/or cystathionine present in the solution based on the amount of pyruvate and/or ammonia formed. Expression vectors and isolation procedures for CBS, or derivatives thereof, and CBL, or derivatives thereof, are also provided as well as test kits for carrying out the assay. In preferred embodiments, the assays can be conducted in 15 minutes or less, with a minimum of enzyme usage.