sistema de expressão heteróloga em levedura auxotrófica para leucina contendo vetor de expressão com marca de seleção defectiva leu2-d, processo de obtenção desse sistema e uso de sequências repetidas para integração múltipla

a presente invenção refere-se à construção de vetor de expressão contendo a marca defectiva leu2-d, que permite a seleção de células transformantes contendo um maior número de cópias do vetor integradas no genoma. o escopo da invenção compreende um sistema de expressão contendo conjunto de vetores e linhagem de levedura auxotrófica, e o uso de sequências repetidas do cromossomo ii, cromossomo iii e rdna 5s da levedura para promover recombinação homóloga nesses loci no genoma da levedura. a presença dessas sequências repetidas no vetor leva à sua integração múltipla. a linhagem auxotrófica para o aminoácido leucina é obtida após modificações genéticas em células de levedura para interromper o gene leu2. as células modificadas são utilizadas como hospedeiras para a expressão de genes presentes em vetores contendo a marca de seleção leu2-d. a transformação da linhagem auxotrófica leu2 com os vetores da invenção possibilita a recuperação da prototrofia quando um alto número de cópias do vetor é integrado, expressando, dessa forma, a proteína codificada pelo gene de interesse inserido no vetor.