Partìculas de alfavìrus e processos para preparação

"PARTìCULAS DE ALFAVìRUS E PROCESSOS PARA PREPARAçãO". São fornecidos aqui processos para a produção de partículas de replicon do alfavírus em altos rendimentos; os RNAs do replicon são submetidos à eletroporação em células permissivas, em que as células estão em uma densidade relativamente alta, junto com pelo menos um ácido nucléico auxiliador que fornece as funções necessárias para o empacotamento. Após um período de cultivo no meio apropriado, as partículas de replicon do alfavírus são coletadas das superfícies das células em que foram produzidas utilizando uma lavagem com sal em que a concentração de sais é de aproximadamente 0,2 até aproximadamente 5 M de cloreto de sódio, cloreto de cálcio, cloreto de magnésio, cloreto de potássio, acetato de amónio, bicarbonato de amónio, entre outros. Após a diluição, se necessário, as partículas podem ser purificadas através de uma técnica cromatográfica adequada. Provided herein are methods for producing alphavirus replicon particles in high yield; replicon RNAs are electroporated into permissive cells, where the cells are at a relatively high density, together with at least one helper nucleic acid providing the necessary functions for packaging. After a growth period in appropriate medium, alphavirus replicon particles are harvested from the surfaces of the cells in which they were produced using a salt wash in which the salt concentration is from about 0.2 to about 5 M sodium chloride, calcium chloride, magnesium chloride, potassium chloride, ammonium acetate, ammonium bicarbonate, among others. After dilution, if necessary, the particles can be purified by a suitable chromatographic technique.