Developing herbicide resistant lentil (Lens culinaris Medikus subsp. culinaris) through Agrobacterium mediated transformation

يعد العدس Lens culinaris Medikus sub sp. culinaris أحد المحاصيل البقولية الحبية الغذائية المهمة, و يعود ذلك إلى احتواء بذوره على نسبة عالية من البروتين. تسبب الأعشاب الضارة فقدا كبيرا في غلة هذا الأعشاب الضارة فقدا كبيرا في غلة هذا المحصول نظرا لانخفاض قدرته التنافسية معها ؛ إذ أنه لا شكل غطاء نباتيا كثيفا إلا في مرحلة متأخرة من عمر النبات. نظرا لعدم وجود مبيدات أعشاب انتخابية على العدس, و لقلة البحوث المتعلقة بالتحوير الوراثي لهذا المحصول فقد هدف هذا البحث إلى إرساء طريقة مناسبة لتحوير العدس وراثيا و إكساب النباتات صفة المقاومة لمبيد الأعشاب ammonium glufosinate. تم استخدام البكتيريا Agrobacterium tumefaciens كوسيط في عملية التحوير, حيث حورت السلالة AgL0 من هذه البكتيريا لتحتوي على البلازميد المسمى pCGP1258 الذي يحمل المورثة bar التي تمنح صفة المقاومة لمبيد الأعشاب و المورثة gusA شائعة الاستخدام في الكشف عن الخلايا المحورة و لاحقا عن النباتات المحورة وراثيا. استخدم في هذا البحث ثلاثة مدخلات من العدس و هي ILL 5588, ILL 5582 و ILL 5883, و نفذت التجارب بطريقة زراعة الأنسجة. تم انتخاب النباتات لمدة 18 أسبوعا على وسط مغذي يحتوي الليتر منه على 20 مع ammonium glufosinate. من ثم, تم تطعيم الأفرع الخضرية الناتجة على أصول بذرية غير محورة للحصول على جذورها, ثم نقلت النباتات إلى أصص تحتوي على تربة معقمة و تحت ظروف متحكم بها في غرفة الزراعة بهدف تقسيتها. استخدم التفاعل التسلسلي البوليميرازي PCR للتأكد من نجاح عملية انتقال المورثة bar إلى النباتات الناتجة (المحورة), و تم تقييم عمل هذه المورثة وظيفيا من خلال دهن الأوراق بالمبيد ammonium glufosinate, حيث أبدت الأوراق مقاومة لهذا المبيد. كما تم تقويم نشاط المورثة gusA عن طريق تلون أنسجة الأوراق و الأزهار باللون الأزرق الناتج عن تفاعل الأنزيم β-glucuronidas (GUS), الذي تشفر له هذه المورثة مع مادة X-gluc التي تضاف لوسط التفاعل. لقد استطعنا أن نؤكد إدماج المورث bar في نبات مقاومة لمبيد ammonium glufosinate. Lentil (Lens culinaris Medikus sub sp. culinaris) is an important food legume and is valued for its seeds with high protein content. Lentil is a weak competitor to weeds. High percentage of losses in seed yield is due to infestation. The production of herbicide-tolerant genetically modified crops has become a common practice. Weed transgenic soybean resistant to broad-spectrum herbicides was developed. Only very few attempts were undertaken to produce transgenic lentil. This study attempted to investigate the utility of introducing a herbicide tolerance gene into lentil. The plasmid construct pCGP1258, harboring the bar gene conferring resistance to the herbicide ammonium glufosinate and the gusA reporter gene, was insert