Production and partial purification of protease by fusarium spp. by solid state fermentation

استخدمت في هذا البحث عزلة Fusarium spp. المعزولة من التربة و المنماة على وسط potato dextrose agar و من ثم نميت على وسط نخالة الحنطة–جابك دوكس لغرض إنتاج أنزيم البروتييز المتعادل، وجد أن إضافة الفركتوز إلى وسط النمو رفع من إنتاجية أنزيم البروتييز و وجد كمدعم لإنتاج الأنزيم أيضا، و حصلت النمو رفع من انتاجية أنزيم البروتييز و وجد كمدعم لإنتاج الأنزيم أيضا، و حصلت إنتاجية الأنزيم بتخمرات المزارع شبه الصلبة بعد تنمية العفن على وسط النخالة المرطب بوسط جابك – دوكس، قدرت الظروف المثلى لإنتاج الأنزيم كالآتي: كانت نسبة الترطيب 1:30, درجة الحرارة المثلى 25 م, الرقم الهيدروجيني الامثل 7.0, مدة الحضن 9 أيام بحجم اللقاح 1 x 106 خلية\مل, و المصدر الكاربوني و النيتروجيني الأمثل الفركتوز و الأمونيوم نايتريت على التوالي، أستخلص البروتييز من راشح المزرعة الفطرية و أجريت خطوات التنقية بالترسيب بأملاح الأمونيوم و كانت نسبة التشبع المثلى %60 و من ثم تمت ديلزة الأنزيم ضد دارئا، و أخيرا التنقية بعمود المبادل الأيوني السالب (DEAE-cellose) و كانت الفعالية النوعية للأنزيم المنقى 30.211 (u/mg) و عدد مرات تنقية 8.945 و حصيلة %0.188, اتصف الأنزيم البروتييز المنقى بالفعالية المثلى و الثبات على رقم هيدروجيني 6.0 - 11 و 11.0 على التوالي, درجة الحرارة المثلى للفعالية و الثبات 40م° 20م° لمدة 20 دقيقة و قيم السرع القصوى 2 و 3.9 تجاه الكازئيين و البومين المصل البقري على التوالي و قيم الثوابت الحركية 1.5 mg/ml و 3 على التوالي تجاه الكازئيين و البومين المصل البقري. In this paper, a strain of Fusarium spp., is grown on potato dextrose agar and on wheat bran Czapek Dox medium. It was found to produce neutral protease. Fructose, when added to the culture medium was found to give rise to the neutral protease produced in the presence of fructose and was also found to enhance the production of neutral protease. Production was carried out by solid state fermentation the fungi were grown on czepek-Dox with wheat bran culture medium. The optimum conditions were determined as follows, dilution ratio 1 : 30, temperature 25° C, pH 7.0, incubation time 9 days, inoculums size 1 × 106 (spore / ml), carbon source and nitrogen source were fructose ,ammonium nitrate respectively. The protease was isolated from the culture filtrates and was DEAE (diethylaminoethyl) DEAE-cellose. The specific activity of pure enzyme was 30.211 u / mg, with No. of fold 8.945 and yield 0.188 %, gradient buffer treatment, and characterization of pure enzyme optimum pH, pH stability 6- 11 and 11 respectively. Optimum temperature and stability temperature 40° C and 20° C and had. V max of 2 of protein and Km value of 1.5mg / ml towards