Detection of trypanosoma evansi in camels using syber green1 real time PCR assay

يسبب مرض التريبانوسوما في الجمال خسائر ملحوظة في العديد من مناطق تربية الجمال في العالم. و هذا المرض يسببه طفيل من نوع تريبانوسوما إيفانساى. في هذه الدراسة تم جمع عدد 75 عينة دم من الجمال يتوقع إصابتها بمرض سارا (التريبانوسوما في الجمال) و تم عمل شرائح من هذه العينات و صبغها بصبغة الجمسا و فحصها تحت الميكروسكوب. و أظهرت النتائج إصابة عدد 9 من 75 عينة (12 %) بطفيل التريبانوسوما إيفانساى في حين تم اكتشاف وجود الحامض النووي الخاص بطفيل التريبانوسوما إيفانساى لعدد 72 من 75 عينة بنسبة 96 % و ذلك باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل ذو الزمن الحقيقي باستخدام بادئ تتابع وراثي خاص بهذا الطفيل. كما كانت نقطة التعاظم للعينات الإيجابية تظهر إتحادها عند درجة حرارة 85 درجة مئوية. يعد استخدام تفاعل البلمرة المتسلسل ذو الزمن الحقيقي اختبار يمكن إجراؤه للكشف المباشر لطفيل التريبانوسوما إيفانساى في دماء الجمال المصابة و كذلك يمكن استخدامه لدراسة وبائية المرض بين الجمال و الأنواع الأخرى من الحيوانات التي يمكن أن تصاب بهذا الطفيل. Camel Trypanosomasis caused by Trypanosoma evansi is still a serious problem in camel husbandry which causes considerable losses in many camel-rearing regions of the world. In the present study, 75 camels clinically suspected for surra were examined parasitologicaly by giemsa Stained blood smear and for DNA amplification by real time PCR. Giemsa stained blood smears on microscopical examination detected only 9 out of 75 camels (12%) as positive for the presence of T. Evansi. While, out of 75 DNA samples prepared from camel blood, 72 were positive by real time PCR assay (96%). Primers (TR3, TR4) derived from nuclear repetitive gene of T. Evansi and syber greenl fluorescent dye has been used. The melting peak chart of the positive samples showed one single peak at an average TM of 85.0°c. Application of this real time PCR to clinical samples resulted in rapid, direct detection of T. Evansi in blood of naturally infected camels. The described real time PCR provides a valuable tool to study the epidemiology of T. Evansi infection in camels and other susceptible animal population.