白N6-甲基腺苷修饰及其调控蛋在脑缺血中的表达变化及意义 Expression Changes and Significance of N6-Methyladenosine and its Regulatory Proteins in Cerebral Ischemia

目的 本研究通过探讨N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine，m6A）修饰及其调控蛋白在脑缺血小鼠中的表达变化，为脑缺血治疗的分子靶点研究提供参考。 方法 取60只雄性C57BL/6J小鼠，随机分为假手术组、脑缺血1 d组、脑缺血3 d组和脑缺血7 d组，每组各15只，采用线栓法制作右侧大脑中动脉梗死模型，于缺血1 h进行拔栓再灌注。通过RNA提取及斑点印迹实验检测小鼠缺血侧脑组织RNA m6A水平；使用荧光定量逆转录PCR检测小鼠缺血侧脑组织甲基转移酶3（methyltransferase 3，Mettl3）、甲基转移酶14（methyltransferase 14，Mettl14）、FTO α-酮戊二酸酯依赖性双加氧酶（FTO alpha-ketoglutarate dependent dioxygenase，Fto）、RNA去甲基化酶alkB同源基因5（alkB homolog 5，RNA demethylase；Alkbh5）、YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1（YTH N6-methyladenosine RNA binding protein 1，Ythdf1）、Ythdf2和Ythdf3的mRNA表达水平；利用免疫印迹实验检测缺血侧脑组织Mettl3、Mettl14、Fto、Alkbh5、Ythdf1、Ythdf2和Ythdf3蛋白的表达水平；借助免疫荧光染色观察缺血侧脑组织梗死周边区神经元中Mettl3、Fto、Ythdf1、Ythdf2和Ythdf3蛋白的表达变化情况。 结果 与假手术组相比，脑缺血3 d组脑组织RNA的m6A水平升高（1.620±0.339 vs. 1.000±0.192，P=0.0343）。①甲基转移酶表达情况：脑缺血7 d组Mettl3 mRNA水平降低（0.675±0.059 vs. 1.000±0.131，P=0.0331）；脑缺血1 d组Mettl3（0.548±0.107 vs. 1.000±0.056，P=0.0398）、Mettl14（0.534±0.218 vs. 1.000±0.018，P=0.0108）蛋白表达水平降低；脑缺血3 d组Mettl3（0.410±0.341 vs. 1.000±0.056，P=0.0084）、Mettl14（0.429±0.283 vs. 1.000±0.018，P=0.0026）蛋白表达水平也均下降；免疫荧光