Transformation of fungal grapevine trunk disease pathogens with the green fluorescent protein gene [Vitis vinifera L.]

Eutypa lata and Phaeomoniella chlamydospora are important fungal grapevine trunk disease pathogens. Studies of their epidemiology and disease progression are hampered by the slow growth rates of the fungi and a lack of molecular tools. A protoplast-based transformation system was developed using hygromycin resistance as a positive selectable marker. The system was used to introduce a green fluorescent protein reporter gene that was expressed in the hyphae of both species. The reporter strains will be useful tools for further epidemiological studies. Furthermore, the transformation system will allow for genetic dissection of candidate pathogenicity or virulence genes by targeted replacement or disruption, in order to discern the rate of these genes in the disease process [Eutypa lata e Phaeomoniella chlamydospora sono funghi patogeni importanti agenti di malattie del tronco della vite. Gli studi sulla loro epidemiologia e sulla progressione della malattia sono ostacolati dalla lenta crescita di questi funghi e dalla mancanza di strumenti molecolari. E' stato sviluppato un sistema di trasformazione basato su protoplasti utilizzando la resistenza all'igromicina come marcatore positivo selezionabile. Il sistema è stato utilizzato per introdurre il gene reporter di una proteina fluorescente verde, che veniva espressa nelle ife di ambedue le specie. Questi ceppi reporter costituiranno strumenti utili per ulteriori studi di carattere epidemiologico. Inoltre, il sistema di trasformazione consentirà la discriminazione genetica della patogenicità candidata o dei geni della virulenza mediante sostituzione o rottura mirata, allo scopo di distinguere il livello di importanza di questi geni nel processo patologico.]