应用双靶标CRISPR慢病毒载体在间充质干细胞中稳定敲除lncRNA DANCR基因

R31; [目的]应用CRISPR/Cas9方法,构建特异性靶向长链非编码RNA DANCR基因两端的双靶标慢病毒载体,稳定敲除间充质干细胞(MSC)中的DANCR基因,为研究DANCR的生物学功能奠定基础.[方法]首先设计靶向DANCR的5'和3'端的sgRNA (single-guide RNA),转染293FT细胞,提取293FT细胞基因组DNA,验证靶向序列的有效性.然后通过gateway和酶切连接的方法,将分别靶向5'和3'端的两条有效sgRNA序列连接至同一慢病毒CRISPR载体.最终使用293FT进行慢病毒包装,收获病毒感染MSC,检测MS...

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Bibliographische Detailangaben
Veröffentlicht in:	Zhongshan da xue xue bao. Zhongshan daxue xuebao yixue kexue ban = Journal of Sun Yat-sen University. Yi xue ke xue ban 2019, Vol.40 (1), p.14-22
Hauptverfasser:	彭丹, 钟小敏
Format:	Artikel
Sprache:	chi
Schlagworte:	CRISPR DANCR MSC 慢病毒载体长链非编码 RNA
Online-Zugang:	Volltext
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Beschreibung
Zusammenfassung:	R31; [目的]应用CRISPR/Cas9方法,构建特异性靶向长链非编码RNA DANCR基因两端的双靶标慢病毒载体,稳定敲除间充质干细胞(MSC)中的DANCR基因,为研究DANCR的生物学功能奠定基础.[方法]首先设计靶向DANCR的5'和3'端的sgRNA (single-guide RNA),转染293FT细胞,提取293FT细胞基因组DNA,验证靶向序列的有效性.然后通过gateway和酶切连接的方法,将分别靶向5'和3'端的两条有效sgRNA序列连接至同一慢病毒CRISPR载体.最终使用293FT进行慢病毒包装,收获病毒感染MSC,检测MSC中DANCR敲除效率.[结果]在证明靶向DANCR基因两端的sgRNA序列均单独有效的基础上,将靶向5'和3'端的sgRNA进行组合,成功构建靶向DANCR的双靶标慢病毒载体.将载体进行慢病毒包装后感染MSC,成功获得DANCR敲除的MSC.[结论]应用CRISPR方法成功构建敲除DANCR的慢病毒载体,能高效稳定地敲除MSC中的DANCR基因.
ISSN:	1672-3554