Desarrollo y validación de un método por HPLC para la determinación de niveles de vitamina A en leche materna. Su aplicación a una población rural de Argentina

Se desarrolló y validó una metodología para la cuantificación de vitamina A en leche humana. Se determinaron los niveles en 223 muestras correspondientes a los meses 5, 6 y 7 posparto, obtenidas en la provincia de Santiago del Estero. Las muestras (500 µL) se saponificaron con hidróxido de potasio/ etanol, se extrajeron con hexano, se llevaron a sequedad y se reconstituyeron con metanol. Se utilizó una columna RP-C18, fase móvil metanol /agua (91:9 v/v) y detector de fluorescencia (lambda excitación 330 nm y lambda emisión 470 nm) para la separación y cuantificación de vitamina A. Los parámetros analíticos de linealidad (r²: 0,9995), límites de detección (0,010 µg/mL) y de cuantificación (0,025 µg/mL), precisión del método (desvío estándar relativo, RSD = 9,0% en el día y RSD = 8,9% entre días) y exactitud (recuperación = 83,8%) demuestran que el método desarrollado permite cuantificar la vitamina A en forma eficiente. Los valores promedios + desvío estándar (DE) obtenidos en las muestras analizadas fueron 0,60 ± 0,32; 0,65 ± 0,33 y 0,61 ± 0,26 µg/mL para 5º, 6º y 7º mes, respectivamente. No se observaron diferencias significativas en los tres meses analizados y los valores hallados fueron similares a los de bibliografía. El 19,3% del total de la población estudiada presentó niveles inferiores a 0,40 µg/mL, lo que supone un riesgo para los niños de ese grupo, ya que son necesarios al menos 0,50 µg/mL para cubrir los requerimientos diarios del bebé .SUMMARY. A methodology for the quantification of vitamin A in human milk was developed and validated. Vitamin A levels were assessed in 223 samples corresponding to the 5th, 6th and 7th postpartum months, obtained in the province of Santiago del Estero, Argentina. The samples (500 µL) were saponified with potassium hydroxide/ ethanol, extracted with hexane, evaporated to dryness and reconstituted with methanol. A column RP-C18, a mobile phase methanol /water (91:9 v/v) and a fluorescence detector (lambda excitation 330 nm and lambda emition 470 nm) were used for the separation and quantification of vitamin A. The analytical parameters of linearity (r²: 0.9995), detection (0.010 µg/mL) and quantification (0.025 µg/mL) limits, precision of the method (relative standard deviation, RSD = 9.0% within a day and RSD = 8.9% among days) and accuracy (recovery = 83.8%) demonstrate that the developed method allows the quantification of vitamin A in an efficient way. The mean values + standard deviation (SD) obtained for th