Isolation and partial purification of thymidlit synthease enzyme from Calus lettuce plant (Lactuca sativa, L.)

ABSTRACT Callus from hypocotyl explants of lettuce (Lactuce sativa , L.) was initiated on a modified Murashige and Skoog medium containing 1.0 mg/l of benzyladenine (BA) and naphthalene acetic acid (NAA)as growth factors. Thymidylate synthase (EC 2 . 1 . 1 . 45) was found in lettuce callus and purified about 100 fold treatment by ethanol and chloroform , ammonium sulfate and gel filtration on sephadex G – 150. Some properties of the partial purified enzyme from callus were investigated . The molecular weight was found to be a round 30000 D. The partially purified enzyme has an optimum pH of 6.8 with 50 mM potassium phosphate buffer with incubation temperature 30C. The Michaelis - Menten constant for deoxyuridinemonophosphate (dUMP) was 1-05×10-5M and for tetrahydrofolate (THF) 3.339 × 10-3M .الخلاصةاستحدث الکالس من قطع السیقان تحت الفلقیة لبادرات نبات الخس (Lactuce sativa , L.) النامیة على وسط موراشیج وسکوک المحور والمضاف الیه 1.0 ملغم / لتر من البنزایل ادنین والنفثالین حامض الخلیک کمنشطات نمو. نقی انزیم الثایمدلیت سینثیز (TS) المعزول من کالس الخس بمقدار 100 مرة بوساطة معاملته بالایثانول والکلوروفورم. وکبریتات الامونیوم وکذلک من خلال تمریره بعمود الفصل الکروماتوغرافی الحاوی على الجیل من نوع السیفادکس G – 150 . ودرس عدد من صفات الانزیم المنقى جزئیاً من الکالس, وجد ان قیمة الوزن الجزیئی التقریبی مساویة لـ 30000 دالتون مستل من اطروحة الدکتوراه للباحث الثالثواعطى الانزیم افضل فعالیة عند الدالة الحامضیة 6.8 عند استخدام البوتاسیوم – فوسفیت بترکیز 50 ملی مولار بوصفه محلولاً منظماً ودرجة حرارة 30 مْ . وکانت قیمة ثابت میکیلس (Km) مساویة لـ 1.05 × -510 مولار للدی اوکسی یوردین احادی الفوسفیت و 3.339 × -310 مولار للتتراهیدروفولیت.