A restriction enzyme from escherichia coli purification and general properties

Abstract An endonuclease restriction enzyme has been purified from E. coli about 40-fold with DNAse and RNAse recoveries of about 3%. The purification steps included precipitation of the enzyme with ammonium sulphate, and reclaimed it through Sephadex G-100 and DEAE-cellulose chromatography. The purified endonuclease was able to break lambda DNA into three bands. The enzyme has 5% of carbohydrate moiety which means it is a glycoprotein. Lastly, the comparison with other commercial restriction endonucleases proves that this enzyme is a restriction enzyme with enzymic activity dependent on Mg2+- تمت تنقية أنزيم مقيد من بكتريا القولون حوالي 40-مرة مع استرداد مقداره 3 %، و تضمنت خطوات التنقية ترسيب الأنزيم بواسطة كبريتات الامونيوم ثم استرجاعه بواسطة كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي (خلال عمودي سيفادكس-100 و دي-سليلوز)، و تم اختبار الأنزيم من خلال قطعه لدنا العاثية لامبدا إلى ثلاثة حزم، كما وجد 5 % كربوهدرات مما يعني كونه بروتين سكري. أخيرا، و مع مقارنة الأنزيم بأنزيمات مقيدة تجارية، فأن الأنزيم أثبت أنه أنزيم مقيد يعتمد في نشاطه على أيون المغنيسيوم.