Prenatal diagnosis of 21 trisomy by quantification of methylated fetal DNA in maternal blood: study on 10 pregnancies

Introducere. Sindromul Down este o boală gravă, lipsită de terapie patogenică. Singurele posibilităţi de reducere a consecinţelor bolii le reprezintă screeningul şi diagnosticul prenatal. Standardul de aur în diagnosticul prenatal este analiza cromosomică a celulelor fetale obţinute prin proceduri invazive. Pentru reducerea complicaţiilor, în ultimii ani au fost dezvoltate diferite metode de detecţie a celulelor sau ADN-ului fetal în sângele matern. Scop. Scopul studiului a fost verificarea aplicabilităţii metodei de cuantificare prin imunoprecipitare a ADN-ului fetal metilat din sângele matern în diagnosticul prenatal al trisomiei 21. Metodă. Am analizat probe de la 12 gravide (7 cu făt cu trisomie 21 şi 5 cu făt euploid confirmate citogenetic), două probe fiind eliminate din considerente tehnice. Pentru fiecare probă am efectuat: extracţia ADN-ului total (matern şi fetal), fragmentarea ADN-ului, imunoprecipitarea ADN-ului metilat, spălarea, izolarea ADN-ului şi qPCR pentru ADN-ul imunoprecipitat. Pentru evidenţierea regiunilor metilate specifice pe cromosomii 21 fetali am utilizat opt perechi de amorse specifice cromosomului 21. În final, am analizat rezultatele qPCR aplicând formula: D=-6,331+0,959XEP4+1,188XEP5+0,424XEP6+0,621XEP7+0,028XEP8+0,387XEP10-0,683XEP11 +0,897XEP12 unde XEPi= valoarea fracţiei pentru fiecare marker. Rezultate. În toate sarcinile normale, valoarea factorului D a fost negativă concordant cu absenţa trisomiei (specificitate 100%). În 5 din 6 sarcini cu trisomie 21 valoarea factorului D a fost pozitivă, ceea ce indică o sensibilitate crescută. Totuşi, pentru estimarea precisă a metodei este necesară analiza mai multor cazuri, ceea ce ar permite obţinerea de date valabile statistic