A transcriptomic approach toward understanding PAMP-driven macrophage activation and dietary immunostimulation in fish

Los peces son claramente el grupo más exitoso y diverso de vertebrados, representando el 40% de todas las especies de vertebrados y mostrando un impresionante nivel de diversidad en distintos aspectos biológicos. Exhiben un gran número de particularidades genómicas únicas entre los vertebrados, que presentan a los peces como un modelo muy interesante para diversas disciplinas, en particular aquellas relacionas con la evolución. Por estas razones, algunas especies de peces han tenido un papel muy importante en los últimos años en el incremento del conocimiento de la especialización del genoma en vertebrados. Por otra parte, tienen una importancia vital como comida, siendo la acuicultura un sector productor alimentario esencial en todo el mundo. El objetivo del presente trabajo ha sido caracterizar ciertos aspectos moleculares y funcionales del sistema inmune de dos especies distantes en la evolución, Sparus aurata (dorada) y Oncorhynchus mykiss (trucha arco iris), con especial énfasis en sus respuestas transcriptómicas a diferentes estímulos relativos a patógenos. Con esta finalidad, análisis in vivo e in vitro fueron combinados para evaluar mecanismos inmunitarios globales de estos teleósteos. Los Macrófagos representan un grupo importante de células que poseen un papel principal en la iniciación y coordinación de la respuesta inmune. Se desarrolló y caracterizó un cultivo primario de macrófagos diferenciados in vitro de dorada, investigando aspectos como morfología, capacidad fagocítica y respuesta a lipopolisacárido (LPS) de este tipo celular. En paralelo, CD83, una proteína de membrana utilizada como marcador estándar de células dendríticas en mamíferos fue clonada y analizada usando Q-PCR (PCR a tiempo real, cuantitativa). A continuación, los macrófagos diferenciados de dorada fueron comparados con los de trucha, evaluando sus diferencias en la activación de vías antivirales bajo la inducción de LPS y las implicaciones de la presencia de contaminantes en preparaciones comerciales de LPS. La expresión de varios genes antivirales fue cuantificada mediante Q-PCR. Para analizar más profundamente las respuestas inmunes de macrófagos, su regulación transcriptómica en respuesta a LPS bacteriano y Poly (I:C) viral fue estudiada utilizando una plataforma de microarray de cDNA enriquecida en genes con funciones inmunes, resultados que fueron posteriormente validados con Q-PCR, junto con el análisis mediante western blot de la liberación de la citoquina inflamato