Extraction and purification of lipopolysaccharide from Escherichia coli (local isolate) and study its pyrogenic activity

تهدف الدراسة الحالية إلى استخلاص وتنقية متعدد السكريد الشحمي من جراثيم الاشريكيا القولونية (العزلة المحلية) مع تحديد الوزن الجزئي، النقاوة والفعالية البايولوجية له ومقارنته مع متعدد السكريد الشحمي القياسي المستخلص من جراثيم الاشريكيا النمط المصلي O55 :B5. تم استخدام طريقة الفينول الحار في استخلاص متعدد السكريد الشحمي لجرثومة الاشريكيا القولونية وتم تحديد الوزن الجزئي ومدى تلوث البروتيني لمتعدد السكريد الشحمي المستخلص باستخدام الفصل الكهربائي لهلام كبريتات دوديكل الصوديوم متعدد الأكريلامايد مع التصبيغ بصبغة البروتين وصبغة نترات الفضة الحساسة لصبغ متعدد السكريد الشحمي، واستخدم الاستشراب السائل عالي الأداء لتحديد مدى النقاوة مستخلص متعدد السكربد الشحمي كما تم قياس مدى إنتاجه للحمى في الأرانب باستخدام اختبار إنتاج الحمى في الأرانب، بينت الدراسة أن استخدام طريقة الفينول الساخن مع المعاملة الانزيمية أعطت نسية استخلاص عالية 242 ملغرام مع نقاوة مرتفعة لمتعدد السكريد الشحمي وبدون تواجد الملوثات البروتينية والنووية. تراوح الوزن الجزيئي لمتعدد السكريد الشحمي بين 15-23 كيلو دالتون باستخدام طريقة الترحيل الكهربائي في هلامة متعدد الاكريلامايد، واظهر متعدد السكريد الشحمي المستخلص نقاوة وصلت إلى 100% عند مقارنته مع متعدد السكريد القياسي بواسطة طريقة الاستشراب السائل فائق الأداء، كما تم إثبات وجود الفعالية الإحيائية لمستخلص متعدد السكريد الشحمي باستخدام اختبار إنتاج الحمى في الأرانب. ختاما أظهرت الدراسة إمكانية استخلاص متعدد السكريد الشحمي بنقاوة عالية مقارنا مع متعدد السكريد القياسي باستخدام طريقة الفينول الحار مع عدم وجود تلوث بالأحماض النووية أو بالبروتين، كما بينت الدراسة أن الجزء الخشن من متعدد السكريد الشحمي المستخلص كان أخف وزنا عند مقارنته مع متعدد السكريد الشحمي القياسي مع عدم وجود تأثير مثبط لفعاليته البيولوجية التي بقيت سليمة. In this study, we tried to extract and purify the LPS from e. coli local isolate and determine the molecular weight, purity, and pyrogenic effect of the product and compare it with standard e. coli O55 :B5 LPS, the e. coli LPS was extracted by using hot phenol method then SDS-PAGE was used with both coomassie blue and silver nitrate stain to determine its molecular weight and protein contamination also we used HPLC to the estimation of e. coli LPS purity and finally the pyrogenicity of extracted e. coli LPS was tested by using rabbit pyrogen test. the result showed that the hot phenol method with enzymatic treatment gave highly pure LPS with a high yield reach up to 242.4 mg, staining the SDS page gel with coomassie blue and silver nitrate uncover the high purification of the extracted LPS (ELPS) with no protein contamination, with a molec