低氧激活HIF-1α抑制人牙周膜成纤维细胞的成骨分化

目的探讨低氧环境对人牙周膜成纤维细胞（periodontalligamentcells，PDLCs）成骨分化的影响，以及低氧诱导因子?1α（hypoxiainduciblefactor?1α，HIF?1α）在该过程中的作用。方法组织块法原代分离牙周膜标本中PDLCs，采用激光共聚焦检测波形蛋白与细胞角蛋白表达。PDLCs分别在常氧（20%体积分数O2）培养以及低氧（1%体积分数O2）培养12～72h，检测常氧组与低氧组PDLCs碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）活性，比较成骨标志物ALP、I型胶原（Collogen?1，COL1）、成骨特异性转录因子（runtrelatedtranscriptionfactor2,RUNX2）的mRNA表达量变化，Western免疫印迹检测HIF?1α表达水平。进一步转染小干扰RNA（HIF?1α?siRNA1，2），检测低氧环境中PDLCs的HIF?1α水平、ALP活性与成骨标志物mRNA表达变化。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果组织块法成功获取PDLCs，PDLCs中波形蛋白阳性表达、细胞角蛋白阴性表达。低氧环境中培养48h后PDLCs中ALP活性下降，ALP、COL1、RUNX2的mRNA表达量显著降低，但HIF?1α蛋白表达升高。HIF?1α?siRNA成功敲低PDLCs中HIF?1α表达，敲低HIF?1α的PDLCs在低氧环境中的ALP活性升高，ALP、COL1、RUNX2的mRNA表达量增加。结论长时间低氧处理能抑制PDLCs成骨分化，敲低HIF?1α表达可逆转低氧对PDLCs成骨分化的抑制作用。