简并PCR结合RACE法克隆希木龙念珠菌CDR1基因

目的 克隆希木龙念珠菌中药外排泵基因（CDR1）,为探讨希木龙念珠菌的耐药机制奠定基础。方法 首先从NCBI基因数据库中找到已知的白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌Cdr1蛋白的氨基酸保守序列,并设计简并引物,PCR扩增获得希木龙念珠菌CDR1cDNA部分片段,接着使用RACE方法分别扩增其5＇和3＇端序列得到完整的CDR1编码序列（CDS）。结果 简并PCR扩增得到预期2 210bp大小的片段; 5＇RACE和3＇RACE分别得到CDR1cDNA 5＇和3＇端片段,经纯化、克隆、测序、比对和拼接分别得到两株菌完整的CDR1cDNA序列; 其编码的蛋白序列经比对发现与其它念珠菌的Cdr1蛋白高度同源。结论 利用简并PCR联合RACE方法能够有效、准确地克隆出希木龙念珠菌CDR1基因。