抗HPVl6E6全蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为了制备特异性识别HPVl6E6蛋白的单克隆抗体，为建立HPV早期诊断试剂盒提供有效试剂，通过细胞融合、间接ELISA方法筛选阳性克隆、多次亚克隆得到稳定分泌抗体的单克隆杂交瘤细胞株，体内诱生法大量制备腹水，过UNOspheresuPrA^TM柱和ENrich^TM。MSEC650分子筛柱纯化，通过蛋白电泳鉴定其纯度并测定抗体浓度，并采用WesternBlot法和间接免疫荧光法验证纯化后HPVl6E6抗体与HPVl6型阳性Caski细胞和HPVl8型阳性Hela细胞特异性结合。建立了亚型为IgG2a的单克隆HPVl6E6-4D4杂交瘤细胞株，两步纯化后得到纯度较高的抗体，可特异性识别HPVl6型阳性的Caski细胞中的E6蛋白，不与Hela细胞反应，为在蛋白水平上检测HPVl6型病毒提供了新手段。