二十碳五烯酸对E．coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1 mRNA的影响

目的探讨二十碳五烯酸（EPA）对黏附侵袭性大肠杆菌（AIEC）LF82感染后肠上皮细胞（Caco-2）紧密连接蛋白（ZO-1）表达的影响。方法用Caco-2细胞株建立体外肠上皮细胞紧密连接模型，分为EPA处理组，EPA0、25、50、100、200μmol／L干预96h；以及EPA（EPA0、25、50、100、200μmol／L）＋EcoliLF82联合处理组，在不同浓度EPA干预96h的基础上，予E．coli LF82分别干预0h、6h、12h。通过细胞形态学观察，MTr法测定细胞生长曲线，以及细胞膜两侧碱性磷酸酶（ALP）活性检测对Caco．2细胞模型进行评价。流式细胞术检测不同浓度EPA对Caco．2细胞凋亡的影响。RT-qPCR检测EPA和／或E．coli LF82作用于Caco．2细胞后ZO-1mRNA的表达情况。酶联免疫吸附法检测Caco．2细胞上清中TNF-α的变化。结果EPA25、50gmol／L处理后，Caco-2细胞存活率均高于0浓度组，且增高呈浓度依赖性（P〈O．05）；EPAl00、200μmol／L处理组的细胞存活率下降呈浓度依赖性，均低于0浓度组（P〈0．05）。EPA浓度为100、200μmol／L时，细胞凋亡率较0浓度组增加（P〈0．05）。单独E．coli LF82干预Caco．2细胞6h、12h后，ZO．1mRNA表达随处理时间延长而减少，均低于未处理组（P〈0．05）。EPA25、50μmol／L干预联合E．coli LF82处理6h或12h，Caco-2细胞的ZO-1mRNA表达随EPA浓度增加而增加，均高于E．coli LF82单独处理组（P〈0．05）。单独E．coli LF82处理6h、12h组的TNF-α分泌随干预时间延长而增加，均高于未处理组（P〈0．05）。EPA25、50μmol／L联合LF82处理6h或12h，细胞上清液中TNF-α分泌量随EPA浓度的增加而减少，均少于单独LF82处理组（P〈0．05）。结论EPA能有效预防E．coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接的破坏，抑制炎症因子的分泌，对肠黏膜屏障有一定的保护作用。