大鼠骨髓来源与前交叉韧带来源MSCs体外生物学特性比较研究

目的 比较大鼠骨髓来源与前交叉韧带（anterior cruciate ligament，ACL）来源的 MSCs 体外增殖及成骨、成软骨、成脂分化潜能的差异。 方法 取 SPF 级 6 周龄雄性 BN 大鼠 10 只，体质量 200～220 g，无菌条件下分别取大鼠骨髓及 ACL，贴壁法培养获取 BMSCs 与 ACL 来源 MSCs 并进行传代，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化。取生长良好的第 3 代细胞，流式细胞仪检测细胞免疫表型 CD34、CD45、CD90 和 CD29 表达；细胞计数试剂盒 8（cell counting kit 8，CCK-8）法检测细胞体外增殖能力，克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力；行成骨、成软骨及成脂体外诱导多向分化能力检测；实时荧光定量 PCR 检测成骨[ALP、骨钙蛋白、RUNX2、BMP-2、分泌性磷蛋白 1（secreted phosphoprotein 1，Spp1）]、成软骨[Ⅱ 型胶原 α1（collagen type Ⅱ α1，Col2α1）、软骨聚糖蛋白（Aggrecan，Acan）、Sox9]及成脂[过氧化物酶体增殖物激活受体 γ2（peroxisome proliferator activated receptor γ2，PPARγ2）、CCAAT/增强子结合蛋白 α]相关基因 mRNA 相对表达量。 结果 第 3 代 ACL 来源 MSCs 与 BMSCs 形态相似，均表现为贴壁生长的长梭形细胞。流式细胞仪检测示，两种细胞均表达 CD29、CD90，基本不表达 CD45 及 CD34。CCK-8 法检测示，ACL 来源 MSCs 的吸光度（A）值（1.11±0.08）显著高于 BMSCs（0.78±0.05），差异有统计学意义（t=3.599，P=0.023）；ACL 来源 MSCs 的细胞集落数[（53.00±5.51）个/孔]亦明显多于 BMSCs[（30.67±4.84）个/孔]（t=3.045，P=0.038）。经成骨、成软骨、成脂体外诱导培养 21 d 后，BMSCs 及 ACL 来源 MSCs 均表现为茜素红、甲苯胺蓝及油红 O 染色阳性。实时荧光定量 PCR 检测示，ACL 来源 MSCs 的 BMP-2、Spp1、Col2α1、Acan、Sox9 及 PPARγ2 mRNA 相对表达量显著高于 BMSCs，差异均有统计学意义（P〈0.0