胶原凝胶构建神经组织工程支架的实验研究

目的研究胶原凝胶支架对大鼠BMSCs增殖和分化的影响，探讨其作为神经组织工程支架的可行性。方法利用I型胶原制备胶原凝胶支架。采用密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs，取第5代细胞制备胶原凝胶-BMSCs复合体。采用扫描电镜、HE染色观察胶原凝胶支架的形态结构及复合培养后细胞形态；MTT检测该支架对BMSCs增殖的影响。取绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）阳性（GFP＋）BMSCs于胶原凝胶支架中培养24h，通过激光共聚焦显微镜及活细胞工作站观察细胞生长及与材料的黏附情况。结果激光共聚焦显微镜及活细胞工作站观察示，GFP＋BMSCs均匀分布于胶原凝胶支架内，大部分GFP＋BMSCs呈梭形，部分细胞伸出突起，部分细胞间形成连接，提示BMSCs在三维空间中生长良好。扫描电镜示胶原凝胶支架为多孔纤维网状结构，BMSCs可黏附于该支架材料上，细胞形态良好。MTT检测示，BMSCs于胶原凝胶支架中培养后3、5、7d的吸光度（A）值均高于单纯BMSCs培养，其中5、7d时组间差异有统计学意义（t=4．472，P=O．011；t=4．819，P=0，009）。HE染色示，胶原凝胶支架呈均质淡粉染细丝样物质。BMSCs在胶原凝胶内培养24h后均匀分布其中；7d时BMSCs形态多样，部分细胞伸出细长突起，具有体外培养的神经元样形态。结论胶原凝胶支架制备简便，具有良好的生物相容性，可作为神经组织工程支架材料。