EMA—PCR技术快速鉴别死活腺病毒的初探

目的 探讨采用叠氮溴化乙锭（EMA）联合聚合酶链反应（PCR）快速鉴别死活腺病毒的方法。方法将不同稀释度的病毒接种至生长良好的单层细胞上，通过细胞病变效应（CPE）的发生情况计算病毒滴度；将3种腺病毒和新城疫鸡瘟病毒分别制备成106 PFU/mL的母液并梯度稀释备用，提取DNA后用PCR扩增后进行凝胶电泳，观察目的片段的扩增结果；分别用0 μg/mL、70 μg/mL、120 μg/mL和150 μg/mL的EMA处理灭活后的腺病毒，提取DNA进行PCR，观察目的片段的电泳结果；用120 μg/mL的EMA处理107 PFU/mL、106 PFU/mL、105 PFU/mL、104 PFU/mL、103 PFU/mL的腺病毒，观察PCR和凝胶电泳结果。结果 104 PFU/mL及以上滴度的病毒DNA PCR后得到阳性条带，其他滴度的病毒DNA PCR后未检测到阳性条带；3个型别的腺病毒（共8个分离株）的DNA均扩增出目的条带，新城疫鸡瘟病毒的DNA未扩增出目的条带；120 μg/mL及150 μg/mL的EMA抑制灭活腺病毒DNA 扩增，未得到阳性条带；120 μg/mL EMA不影响107 PFU/mL、106 PFU/mL、105 PFU/mL的腺病毒活病毒DNA扩增，得到阳性条带。结论 本研究证实EMA-PCR方法可快速鉴别死活腺病毒，能有效避免单纯PCR检测腺病毒产生的假阳性结果。