基质细胞衍生因子1对于血管内皮细胞增殖影响及其相关机制研究

目的探讨人退变髓核细胞（nucelus pulposuscells，NPCs）分泌的基质细胞衍生因子1（stromal celld erivedfactorl，SDF-1）对血管内皮细胞（vascular endothelial cells，VECs）的增殖影响及其相关分子机制。方法将术中摘取的椎间盘组织分离、培养人退变NPCs，取第1代转染SDF-1过表达慢病毒。取第2代细胞，转染或未转染过表达SDF-1慢病毒后，种植于alvetex 三维培养支架上行三维培养，并与人HMEC-1细胞（即VECs）共培养。共培养72h扫描电镜观察NPCs在支架上的生长情况；细胞计数试剂盒8（cellcountingkit8，CCK-8）法分别检测12、24、48、72h转染组与非转染组HMEC-1增殖情况，以及加入Akt特异性抑制剂GSK690693后24hHMEC-1增殖情况；膜联蛋白V／碘化丙啶法分别检测共培养72h后转染组和非转染组中VECs凋亡率；ELISA法分别检测转染组和非转染组培养基中VEGF含量；Westernblot法检测转染组、未转染组和抑制剂组磷酸化Akt（p-Akt）和总Akt蛋白表达。结果扫描电镜观察示NPCs在三维支架中维持了细胞表型，分泌大量细胞外基质；慢病毒成功转染后，Westernblot检测示SDF-1在NPCs中表达明显升高。在共培养体系中，NPCs过表达SDF-1后可使HMEC-1增殖上升，凋亡率下降，并在细胞外培养基检测中发现VEGF含量显著上升；而在进一步分子机制检测中发现，SDF-1的过表达使HMEC-1中p-Akt水平升高，采用GSK690693特异性抑制Akt表达后，SDF-1对HMEC-1促细胞增殖作用明显降低。结论人退变NPCs高表达的SDF-1有利于VECs增殖，这一调控机制或许与SDF-1-Akt信号通路有关。