抗对硫磷单链抗体在昆虫细胞中的表达及活性鉴定

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,在Sf9昆虫细胞中表达抗对硫磷单链抗体,并评价该重组抗体sc Fv-4C6的分子识别活性。以分泌能特异性识别对硫磷的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6为RNA来源,采用RT-PCR方法扩增抗体的重链和轻链可变区基因,经重叠延伸PCR方法串联拼接获得单链抗体基因片段（sc Fv-4C6）。构建包含目的片段的重组杆粒Bacmidsc Fv-4C6,转染Sf9细胞表达目的蛋白,采用免疫印迹法（Western blotting）检测表达产物,间接竞争酶联免疫吸附（ic-ELISA）法评价产物的生物活性。结果表明：sc Fv-4C6基因片段拼装正确,成功转染Sf9细胞,并在转染后72 h表达量最高,表达的单链抗体大小为28.3 k D;表达产物能特异性识别对硫磷,IC50值为7.9 ng/m L,对甲基对硫磷和杀螟硫磷分别有12%和1.8%的交叉反应率,与亲本单克隆抗体的识别性能相似。该研究表明,具有生物活性的抗对硫磷单链抗体sc Fv-4C6可在昆虫细胞中成功得到表达。