茶树中咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶的基因克隆及其催化活性研究

目的：从茶树中克隆一种可以催化表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）生成甲基化EGCG的酶——咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶（CCo AOMT）,实现甲基化EGCG的酶学合成,为甲基化EGCG的进一步开发利用提供理论依据和技术指导。创新点：本研究首次从茶树中克隆了一条CCo AOMT基因组序列;分析了CCo AOMT基因在不同茶树品种和不同成熟度茶鲜叶中的基因表达规律;证明了CCo AOMT具有催化合成甲基化EGCG的生物活性。方法：采用聚合酶链式反应（PCR）和序列分析获得CCo AOMT的编码序列和基因组序列;采用高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱技术（HPLC-QTOF-MS）分析酶促反应生成的甲基化EGCG产物（图4）;采用实时荧光定量PCR分析CCo AOMT基因的表达差异（图5）。结论：本研究从茶树中克隆了CCo AOMT基因的编码序列（738 bp）和基因组序列（2678 bp）,明确了该基因具有4个内含子和5个外显子;揭示了CCo AOMT可以催化EGCG生成EGCG4＂Me、EGCG3＂Me和EGCG3＇Me等多种甲基化产物;证明了CCo AOMT具有催化生成甲基化EGCG的活性;并发现该基因的表达量高低与茶鲜叶的成熟度呈正相关关系。