雪松疫霉（Phytophthora lateralis）的快速分子检测

由雪松疫霉（Phytophthora lateralis）引起的疫病是一类植物检疫性病害。为建立该病原菌的快速检测技术, 本文比较分析了雪松疫霉和其他疫霉的tRNA序列, 在此基础上设计了一对检测雪松疫霉的特异性引物T1/T2, 该对引物从雪松疫霉中扩增得到1条192 bp的条带, 而其他15种疫霉和其他真菌菌株均无扩增条带, 表明该对引物对雪松疫霉具有特异性。在25 μL PCR反应体系中, 引物T1/T2检测灵敏度为10 pg基因组DNA;而以引物T3/T4和T1/T2进行巢式PCR扩增, 能够检测到1 fg基因组DNA, 使检测灵敏度提高了10 000倍。该检测体系对灭菌水中游动孢子的检测灵敏度可达0. 5个游动孢子, 对人工接种发病的植物组织能够特异性地检测到该病原菌。此外, 进一步建立了该病原菌的实时荧光定量PCR检测体系。