一例遗传性蛋白C缺陷症家系的实验诊断

目的对一个蛋白C（PC）缺陷家系进行临床表型及基因突变检测，初步探讨突变位点的作用机制。方法采用发色底物法和ELISA双抗体夹心法分别检测先证者和家系成员的血浆PC活性和PC抗原含量。用PCR法对先证者PROC基凶9个外显子及其侧翼序列进行扩增，PCR产物纯化后测序，检测基因突变；对于家系成员，仅检测先证者发现基因突变部位的外显子及其侧翼序列。通过对突变前后蛋白质的构象分析，初步推测突变位点的分子机制。结果先证者的PC活性和PC抗原含量分别为38％和33．6％。基因测序显示先证者的PROC基因外显子7区同时存在1个杂合错义突变[C．541T〉G（P．Phe181Val）]和1个无义突变[c．595C〉T（P．Arg199。）]。前者引起181位苯丙氨酸（Phe）变为缬氨酸（Val），后者使199位精氨酸（Arg）突变为终止密码子。其父亲和儿子的PC活性分别为49％和42．2％，PC抗原含量分别为90％和97．4％，存在一个相同的杂合无义突变C．595C〉T。其母亲的PC活性为84．4％，PC抗原含量为100％，外显子7区在位点C．541T〉G存在杂合错义突变。所有成员蛋白S活性和AT活性均在正常范围。结论通过表型检测、家系调查和基因诊断，明确先证者为遗传性PC缺陷症，先证者的2个突变分别来自父亲和母亲，是导致先证者患PC缺陷症的原因，突变位点c．595C〉T可能是导致患者PC活性下降的主要原因。