辐射诱导人骨髓间充质干细胞白噬反应的研究

目的观察辐射条件下人骨髓间充质干细胞（hBMMSC）的自噬反应。方法应用An—nexin—V／PI双标法检测0、2、4、8、10GyX线照射后4hhBMMSC凋亡率和坏死率的变化；通过透射电子显微镜观察0、8、10Gyx线照射后4h的hBMMSC自噬形态学变化，以经典的自噬诱导剂雷帕霉素处理组作为阳性对照，并应用RT—PCR技术检测自噬相关基因Beclinl和微管相关蛋白1轻链3（micro- tubule-associated protein 1 light chain 3 ,MAPLC3，MAPLC3，简称为LC3）mRNA表达。结果在低于8Gy的剂量范围内，hBMMSC的凋亡率随照射剂量的增加而降低，坏死率和死亡（凋亡＋坏死）率随照射剂量的增加而升高，但升高幅度较小。当剂量增至10Gy时，凋亡率升至最高，而坏死率和死亡率的升高幅度增大。并且整体凋亡率变化比坏死率明显。透射电镜观察显示正常对照组中偶见自噬泡（自噬体和自噬溶酶体合称为自噬泡）出现，而照射组及阳性对照组中均可见明显自噬泡聚集，8Gy照射组的自噬泡阳性细胞比例为（71．67±7．64）％，高于10Gy照射组的（56．67±7．64）％。RT—PCR检测结果显示正常对照组中Beclinl mRNA和LC3mRNA表达水平均很低，而照射组及阳性对照组中两个基因的表达明显升高，且8Gy照射组（0．518±0．005、0．408±0．006）表达水平高于10G照射组（0．441±0．002、0．360±0．019）％。结论辐射应激可以诱导hBMMSC的自噬反应，在一定照射剂量范围内，自噬可能对hBMMSC有放射保护作用。