大黄欧文氏菌蔗糖异构酶基因克隆表达及其酶学特性研究

通过PCR克隆得到了不包括信号肽序列的109～1803bp大黄欧文氏菌蔗糖异构酶基因，以pQE30为表达载体可以在大肠杆菌中高效表达SI基因，但容易形成包涵体。通过降低诱导剂IPTG至10μmol／L，28℃低温诱导表达可以改进表达产物的可溶性。重组SI的最适pH为6．0，最适反应温度为30℃。测定的Km为46．8mmol／L，Vm甜为152．2u／mg。重组SI对麦芽糖、海藻糖、棉子糖、三氯蔗糖及廿甲基葡萄糖苷等均不起作用，只利用蔗糖为底物转糖苷，也可以水解对硝基苯酚-α-葡萄糖苷。同时发现重组SI具有转化异麦芽酮糖生成海藻酮糖的活性。