烟夜蛾精氨酸激酶基因的克隆及mRNA表达分析

为了深入了解精氨酸激酶基因的作用和寻求害虫防治新的分子靶标,本研究采用RT-PCR和RACE技术,从烟夜蛾Helicoverpa assulta脂肪体中克隆了精氨酸激酶cDNA序列,命名为HassAK（GenBank登录号：HQ336337）,并采用荧光定量PCR测定了HassAK基因在不同发育阶段（4龄幼虫第1天到化蛹第1天）、不同组织（头部、中肠、脂肪体、体壁和腹足）和不同温度条件下的表达情况。测序和序列分析结果表明,HassAK基因阅读框架全长1068bp,编码355个氨基酸残基,预测蛋白质分子量和等电点分别为40.0kD和5.76。氨基酸序列分析表明,该序列具有精氨酸激酶典型的酶活性部位、酶活性中心位点和能形成离子偶结构的保守区。序列比对结果表明,HassAK与其他昆虫AK的氨基酸序列具有70%以上的一致性。荧光定量分析结果显示,HassAK基因在幼虫头部、中肠、脂肪体、体壁和腹足均可表达,其中以腹足和中肠内的表达水平较高。时序表达分析表明,预蛹期HassAK基因的表达量达到高峰。此外,高温和低温均诱导HassAK基因的表达,说明该基因可能参与昆虫抵御外界不良环境。