酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白。结果构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性。经过筛选得到3个阳性克隆（10,11,4′6号克隆）,经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用。结论经酵母双杂交技术筛选到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白,为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。