儿童急性髓细胞性白血病WAVE1基因对耐药相关基因表达影响的研究

目的探讨儿童急性髓细胞性白血病（AML）中WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVEl）基因参与P糖蛋白（P—gP）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）、肺耐药相关蛋白（LRP）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）表达和调控的机制。方法将52例患儿依据是否在随访期内持续缓解（CCR）分为难治／复发组和缓解组，应用实时定量PCR（RQ-PCR）法和蛋白印迹（Western blot）分别检测52例AML患儿治疗前及疾病发展过程中骨髓单个核细胞（BMMCs）中WAVE1、P—gP、MRP1、LRP及BCRP蛋白和基因mRNA的表达水平。将PCDNA3．1-WAVEl真核表达质粒转染HL60细胞构建WAVEl高表达HL-60细胞，将WAVEl基因的特异性小片段干扰RNA（WAVEl siRNA）转染HL60／ADR构建WAVE1低表达HL60／ADR细胞；Western blot和RQ—PCR法检测基因转染前后白血病细胞系grAVE1、MRP1及BCRP蛋白及基因的表达水平。结果①复发／难治组病例的WAVE1及耐药相关基因水平明显高于缓解组患儿WAVE1基因表达水平（P〈0．05）；②同一患儿初治及复发时的WAVE1基因水平明显高于缓解期表达水平（P〈0．05）；③与HL60细胞相比较，HL60／ADR细胞WAVE1mRNA及蛋白表达水平增加3．53倍及95％；④转染WAVE1后HL60细胞系MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别增加16．54倍、129％，BCRPmRNA和蛋白表达水平分别增加4．93倍及96％，而转染WAVE1 siRNA的HL60／ADR细胞MRP1 mRNA和蛋白的表达水平为干扰前的0．11倍及43％，BCRPmRNA和蛋白的表达水平为转染前的0．14倍及71％。结论WAVE1与儿童AML的病程及预后相关，参与了髓系白血病细胞多药耐药的形成并可影响MRP及BCRP1等多个重要的耐药相关基因的表达和作用。