NF-κBP65亚基siRNA增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡作用的实验研究

目的探讨NF-κBP65亚基siRNA（NF-κBP65siRNA）在体内外增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡的作用及机制。方法培养人胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1，分为空白对照组、阴性干扰序列对照组、吉西他宾组、NF-κBP65siRNA组和联合治疗组。MTT方法检测细胞增殖情况；Western blot方法检测NF-κBP65及凋亡相关蛋白的表达水平；Annexin V-FITC／PI染色流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞凋亡情况；电泳凝胶迁移实验检测NF-κB的DNA结合活性。BxPC-3接种裸鼠皮下建立胰腺癌移植瘤模型。治疗后监测肿瘤体积；TUNEL染色检测移植瘤组织细胞凋亡指数。结果转染后72h，与其他组相比，联合治疗组显著降低了细胞活力指数（P〈0．05），下调了Bcl4和procaspase-3的表达水平，同时上调了Bax的表达水平；流式细胞仪检测结果显示，联合治疗组细胞凋亡率高于其他组（P〈0．05）；EMSA实验结果证实，NF-κBP65siRNA组和联合治疗组NF-κB的DNA结合活性低于对照组（P〈0．05）。联合治疗能够通过诱导凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长（P〈0．01）。结论NF-κBP65siRNA可以通过抑制NF-κB的DNA结合活性，调控凋亡相关蛋白的表达水平，激活线粒体凋亡途径，从而增强吉西他宾对胰腺癌细胞的促凋亡作用。