原代和传代兔关节软骨细胞糖胺多糖合成的动态观察

背景：软骨细胞体外培养时常发生失分化，传代软骨细胞的失分化程度是确定软骨细胞体外扩增操作时间的重要依据，对组织工程修复软骨效果有重要意义。目的：观察不同接种密度下，软骨细胞合成糖胺多糖的能力。设计、时间及地点：单一样本观察，细胞学体外实验，于2007-01/05 在山西医科大学第二医院骨科实验室完成。材料：1月龄新西兰大白兔5只，雌雄不拘。方法：无菌手术切取兔双膝关节软骨，采用0.4% Pronase酶和0.25 g/L Ⅱ型胶原酶消化分离关节软骨细胞，体外培养。待细胞融合时，换无血清培养液。于换液后12，24，36，48，60 h分别抽取上清液测量糖胺多糖质量浓度。传代2次，重复上述过程。主要观察指标：①倒置显微镜观察细胞形态。②传代对软骨细胞生长的影响。③P0，P1，P2代细胞上清液糖胺多糖质量浓度的差异。结果：P2代以内，软骨细胞形态无明显变化，但P2代细胞内空泡状颗粒增多。传代后，细胞融合时间缩短，但是上清液糖胺多糖质量浓度随传代逐渐下降（P 〈 0.001），且P0，P1，P2代之间两两比较差异有显著性意义（P 〈 0.001）。换液60 h后，P1代软骨细胞糖胺多糖质量浓度较P0代下降24%，P2代较P0代下降74%。换液后时间越长，上清液糖胺多糖质量浓度越大（P 〈 0.001）。换液后时间与传代之间存在交互效应，时间越长，传代细胞与原代细胞上清液糖胺多糖质量浓度相差越大（P 〈 0.001）。 结论：在体外单层培养条件下，原代软骨细胞糖胺多糖合成能力最强，传代后很快大幅下降。细胞融合后连续检测上清液糖胺多糖质量浓度是研究软骨细胞分化的有效方法。