重组腺相关病毒介导NgR^DN基因促进损伤后视神经轴突再生的实验研究

目的探讨大鼠视网膜神经节细胞（RGC）内转染含NgR^DN的重组腺相关病毒（AAV）后对视神经损伤后再生的影响，并观察其与晶状体损伤及巨噬细胞激活之间的关系。方法将45只Wistar大鼠随机分为3组，A组为玻璃体注射携带绿色荧光蛋白（EGFP）的AAV—EGFP组，B组为玻璃体注射AAV—NgR—EGFP组，C组为玻璃体注射AAV—NgR^DN-EGFP组，3种病毒滴度均为5×10^11v．g/ml。每组又分3个亚组，各亚组5只大鼠，1组为玻璃体内注射rAAV组，2组为玻璃体内注射rAAV＋晶状体损伤组，3组为玻璃体内注射rAAV＋酵母多糖组。于玻璃体内注射rAAV后3周进行视神经夹伤，并于夹伤后4d取右眼视网膜进行植片培养，通过βⅢ微管蛋白染色检测视网膜植块边缘的轴突生长情况；于夹伤后2周进行视神经生长相关蛋白（GAP）-43染色，观察视神经轴突再生情况。结果视网膜植片βⅢ-微管蛋白染色表明，在无髓磷脂培养条件下，AAV—NgR—EGFP、AAV—NgR^DN-EGFP对RGC的轴突再生无影响：而在含髓磷脂培养条件下，即模拟体内RGC的轴突生长环境，B组的轴突再生数量（13个4个）还是长度（36μm±4μm）均低于A组（均P〈0．01）；C1组与A1组比较差异无统计学意义，C2和C3组轴突再生的数量及长度均分别高于A2和A3组，C2组（317个±45个、508μm±44μm）更高于C3组（238个±30个、365μm±48μm，均P〈0．01）；视神经GAP-43染色表明，B组视神经轴突再生明显低于A组，c1组轴突再生与A1组差异无统计学意义．而C2和C3组轴突再生显著高于A2和A3组。结论玻璃体内转染AAV—NgR^DN-EGFP同时使RGC处于激活状态可以促进视神经的轴突再生，NgR^DN可以有效拮抗NgR的作用。