siRNA干扰CIC-2表达对人胶质瘤U-87细胞增殖的抑制作用

背景与目的：利用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法。本研究采用siRNA抑制人神经胶质瘤细胞系U-87细胞上容积调控氯通道CIC-2基因的表达，观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响。方法：设计和构建两个针对人CIC-2基因的siRNA真核表达载体，并给予酶切鉴定和DNA序列分析鉴定；用脂质体Lipofectamine^TM2000介导转染，将空载体质粒pSUPER．puro-shRNA和两个重组质粒 pSUPER．puro-shRNA-CIC-21、pSUPER．puro-shRNA-CIC-22分别转染入U-87细胞（依次为PP0组、PP1组和PP2组）；采用RT-PCR检测CIC-2mRNA表达变化；MTT分析检测细胞活性；流式细胞仪检测细胞周期；平板克隆形成实验检测克隆形成率。结果：目的片段成功地连接到真核细胞表达载体pSUPER．puro上。PP1组、PP2组与对照组、PP0组相比较。CIC-2基因的mRNA水平明显降低，细胞生长速度明显减慢。细胞周期进程被阻滞在G1期：细胞的G1期百分含量分别增加了约30．24％、18．04％（P〈0．05）。平板克隆形成试验发现，克隆形成率PP。组[（11．0±1．0）％]、PP2组[（20±3．1）％]明显低于对照组[（46．5±1．6）％]和PP0组[（47．5±2．8）％]（P〈0．01）。结论：干扰人神经胶质瘤细胞系U-87细胞的CIC-2基因表达可以抑制细胞的增殖,提示CIC-2基因可能成为控制人恶性胶质瘤生长的新靶点。