血小板膜糖蛋白αⅡb基因A2334C突变对αⅡbβ3复合物合成及转运的影响——附一例报告

目的探讨血小板膜糖蛋白αⅡb基因A2334C突变对αⅡbβ3复合物合成的影响。方法构建αⅡb基因A2334C真核表达载体，测序正确后用脂质体将其与表达人整合素β3亚基的真核表达质粒αⅡbβ3共转染CH0细胞，对转染后细胞用Westelmblot法鉴定αⅡb基因A2334C突变体在CH0细胞中的总体表达；用流式细胞仪分析转运至细胞膜表面的αⅡb基因A2334C亚基；为了明确突变亚基的亚细胞定位，构建了αⅡb基因A2334C GFP融合蛋白表达质粒并用激光共聚焦显微镜确定GFP融合蛋白的细胞内定位。结果Western blot证明转基因CH0细胞有αⅡb A2334C基因的表达，但是成熟αⅡb的比例较正常对照低；流式细胞仪检测发现在细胞膜上有该亚基的分布，但是只有正常的25％；进一步的融合蛋白细胞内定位研究显示，αⅡb基因．A2334C GFP可以由内质网转运至高尔基体。结论αⅡb基因A2334C突变没有影响αⅡb的合成及其与B3的结合，但是仅有少部分前体αⅡb能够进一步形成成熟的αⅡb，其膜上的表达仅为正常的25％。该突变不影响αⅡbβ3由内质网向高尔基体的转运。该突变的致病机制可能是αⅡb的折叠错误使其容易降解导致膜上αⅡbβ3复合物减少及血小板功能减弱。