耐熱性とキレート剤耐性を獲得したBacillus由来のα-アミラーゼ変異体

好アルカリ性Bacillus sp.KSM-1378株由来の液化型アルカリα-アミラーゼ(AmyK)のドメインBのループに存在するArg181-Gly182とThr183-Gly184をタンパク質工学的に除去し、得られた変異酵素の耐熱性とキレート剤耐性を調べた。Bacillus stearothermophilus由来のα-アミラーゼ(BSA)の立体構造では、Ile181-Gly182(AmyKのThr183-Gly184に相当)の存在がCa2+とAsp207の配位を妨げているので、Arg179-Gly180よりIle181-Gly182を除去した方がα-アミラーゼの耐熱性が増大すると予想されている。然しながら、AmyKのArg181-Gly182とThr183-Gly184を除去した変異体のEDTA耐性は同程度に向上していた。更に、Thr183-Gly184欠損変異体に比べ、Arg181-Gly182欠損変異体の耐熱性の方が明らかに高いことが判明した。従って、AmyKの耐熱性に係わる微細構造はBSAと異なっていることが示唆された。