Die Rolle von follikulären T-Helferzellen bei Patienten mit chronischer Hepatitis C

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1. Verfasser: Sacher, Kathrin Elisabeth (VerfasserIn)
Format: Abschlussarbeit Buch
Sprache:German
Veröffentlicht: Freiburg i. Br. [2019]
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adam_text INHALT 1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS ................................................................................................ 1 2 EINLEITUNG ....................................................................................................................... 5 2.1 DAS IMMUNSYSTEM ................................................................................................. 5 2.1.1 DAS ANGEBORENE IMMUNSYSTEM .................................................................... 5 2.1.2 DAS ADAPTIVE IMMUNSYSTEM .......................................................................... 6 2.1.3 FOLLIKULAERE T-HELFERZELLEN ............................................................................... 8 2.1.3.1 TFH-ZELLEN IN DER PERIPHERIE UND TFH-GEDAECHTNISZELLEN ..................... 11 2.1.3.2 FOLLIKULAERE T-HELFERZELLEN BEI KRANKHEIT ................................................ 13 2.2 HEPATITIS C ............................................................................................................ 14 2.2.1 ADAPTIVE IMMUNANTWORT BEI CHRONISCHER HEPATITIS C ................................ 15 2.3 FOLLIKULAERE T-HELFERZELLEN BEI VIRALEN INFEKTIONSERKRANKUNGEN ....................... 17 2.4 ZIELSETZUNG DER ARBEIT .......................................................................................... 18 3 MATERIAL UND METHODEN .............................................................................................. 20 3.1 MATERIAL ................................................................................................................. 20 3.1.1 CHEMIKALIEN .................................................................................................. 20 3.1.2 PUFFER UND MEDIEN ........................................................................................ 21 3.1.3 BIOLOGIKA ....................................................................................................... 21 3.1.4 FLUORESZENZMARKIERTE ANTIKOERPER ............................................................... 22 3.1.5 MAGNETISIERTE ANTIKOERPER ............................................................................. 25 3.1.6 SOFTWARE ........................................................................................................ 25 3.2 METHODEN ............................................................................................................. 25 3.2.1 ISOLATION, KRYOKONSERVIERUNG UND AUFTAUEN VON PBMCS ......................... 26 3.2.2 ISOLATION VON INTRAHEPATISCHEN LYMPHOZYTEN ............................................ 27 3.2.3 MAGNETISCHE ZELLSELEKTION ........................................................................... 27 3.2.3.1 CD4 + -ZELL SELEKTION MIT DYNABEADS ..................................................... 27 3.2.3 2 CD4 + -ZELL UND CXCR5 + -ZELL SELEKTION MIT MACS KITS .................... 28 3.2.4 PBSE-FAERBUNG .............................................................................................. 30 3.2.5 EXPANSION DER INTRAHEPATISCHEN LYMPHOZYTEN ......................................... 31 3.2.6 ANTIKOERPERFAERBUNGEN UND DURCHFLUSSZYTOMETRIE ........................................ 31 IV 3.2.6.1 OBERFLAECHENFAERBUNG ................................................................................32 3.2.62 INTRAZELLULAERFAERBUNG ................................................................................. 33 3.2.6.3 MULTIZYTOKINFAERBUNG ................................................................................33 3.2.6.3.1 UNSPEZIFISCHE STIMULATION ..............................................................33 3.2.6.3.2 ANTIGENSPEZIFISCHE STIMULATION ......................................................34 3.2.6.3.3 FAERBUNG ............................................................................................ 35 3.2.6.4 GATING-STRATEGIE ..................................................................................... 36 3.2.7 HLA-TYPISIERUNG ...........................................................................................36 3.2.8 NACHWEIS NEUTRALISIERENDER ANTIKOERPER ......................................................37 3.2.9 STATISTISCHE AUSWERTUNG ...............................................................................37 3.3 PATIENTEN ..............................................................................................................38 4 ERGEBNISSE .................................................................................................................. 40 4.1 DEFINITION VON PERIPHEREN TFH-GEDAECHTNISZELLEN .............................................. 40 4.2 PHAENOTYP UND FUNKTION VON TFH-ZELLEN BEI CHRONISCHER HEPATITIS C ............. 42 4.3 INTRAHEPATISCHE TFH-ZELLEN .................................................................................. 44 4.4 FUNKTIONELLE EIGENSCHAFTEN INTRAHEPATISCHER TFH-ZELLEN ................................. 47 4.5 DIE EXPRESSION VON CXCR3 AUF TFH-ZELLEN ......................................................50 4.6 TFH-ZELLEN IN ZUSAMMENHANG MIT KLINISCHEN PARAMETERN ............................... 52 4.7 TFH-ZELLEN BEI VERSCHIEDENEN GRADEN DER LEBERFIBROSE .................................53 4.8 TFH-ZELLEN BEI PATIENTEN MIT AUTOANTIKOERPERN .................................................. 55 4.9 TFH-ZELLEN BEI CHCV PATIENTEN VOR UND NACH ERFOLGREICHER THERAPIE ............ 57 4.10 HCV NEUTRALISIERENDE ANTIKOERPER UND TFH-ZELLEN .............................................58 4.11 NACHWEIS HCV-SPEZIFISCHER TFH-ZELLEN BEI CHCV ........................................... 60 5 DISKUSSION ................................................................................................................... 64 6 ZUSAMMENFASSUNG ..................................................................................................... 78 7 TABELLENVERZEICHNIS ................................................................................................... 79 8 ABBILDUNGSVERZEICHNIS ...............................................................................................80 9 LITERATURVERZEICHNIS .................................................................................................... 81 10 PUBLIKATION ..................................................................................................................89 11 ANHANG .........................................................................................................................90 11.1 TABELLEN ................................................................................................................ 90 11.2 ABBILDUNGEN ....................................................................................................... 103 V 11.3 EIDESSTATTLICHE VERSICHERUNG ...........................................................................105 11.4 ERKLAERUNG ZUM EIGENANTEIL - DISSERTATION ..................................................... 106 11.5 ERKLAERUNG ZUM EIGENANTEIL - PUBLIKATION ........................................................107 11.6 DANKSAGUNG ......................................................................................................108
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