Untersuchungen zur zytotoxischen Aktivität von angereicherten und T-Zell-depletierten NK-Zellen gegenüber AML-Blasten
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2015
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| adam_text | UNTERSUCHUNGEN ZUR ZYTOTOXISCHEN AKTIVITAET VON
ANGEREICHERTEN UND T-ZELL-DEPLETIERTEN NK-ZELLEN
GEGENUEBER AML-BLASTEN
I NAUGURAL-DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES
DER MEDIZIN
DER MEDIZINISCHEN FAKULTAET
DER EBERHARD KARLS UNIVERSITAET
ZU TUEBINGEN
VORGELEGT VON
DITTHARD, KERSTIN SUSANNE
2015
HTTP://D-NB.INFO/1072646420
IV
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IX
1 EINLEITUNG 1
1.1 LEUKAEMIEN IM KINDESALTER 1
1.1.1 AKUTE MYELOISCHE LEUKAEMIEN (AML) IM KINDESALTER 1
1.1.2 BEHANDLUNG DER AKUTEN MYELOISCHEN LEUKAEMIE (AML) IM
KINDESALTER 5
1.1.3 STAMMZELLTRANSPLANTATION (SZT) 7
1.1.4 MINIMALE RESTKRANKHEIT - MINIMAL RESIDUAL DISEASE (MRD) 8
1.2 NATUERLICHE KILLERZELLEN 9
1.2.1 DIE NK-ZELLE UND IHRE BEDEUTUNG FUER DAS IMMUNSYSTEM 9
1.2.2 NK-ZELL MECHANISMEN FUER DAS ERKENNEN VON ENTARTETEN UND
INFIZIERTEN ZELLEN UND FUER *SELBSTTOLERANZ GEGENUEBER GESUNDEN
KOERPEREIGENEN ZELLEN 10
1.2.3 MECHANISMEN DER NK-ZELL-VERMITTELTEN ZYTOTOXIZITAET 12
1.2.4 NK-ZELL-REZEPTOREN 14
1.2.5 EINIGE AN DER INTERAKTION VON NK-ZELLEN MIT AML-BLASTEN BETEILIGTE
ADHAESIONSMOLEKUELE 19
1.2.6 THERAPEUTISCHE BEDEUTUNG DER NK-ZELLEN IN DER
TRANSPLANTATIONSMEDIZIN 20
1.2.7 NK-ZELL-ALLOREAKTIVITAET 23
1.3 FRAGESTELLUNG 27
2 MATERIAL 28
2.1 ALLGEMEINE MATERIALIEN 28
2.1.1 PATIENTENPROBEN, NK-ZELLEN UND ZELLLINIE K562 28
2.1.2 GERAETE 29
2.1.3 GLAS- UND PLASTIKMATERIAL 30
2.1.4 STAMMLOESUNGEN 31
2.2 MATERIAL FUER DIE ISOLIERUNG MONONUKLEAERER ZELLEN 31
2.3 MATERIAL FUER DIE IMMUNMAGNETISCHE ZELLSEPARATION 32
2.4 MATERIAL FUER DIE ZELLZAEHLUNG UND MIKROSKOPIE 33
2.5 MATERIAL FUER DEN ZYTOTOXIZITAETSTEST 32
2.6 MATERIAL FUER DIE DURCHFLUSSZYTOMETRIE 33
2.6.1 GERAETE, LABORARTIKEL UND REAGENTIEN 33
2.6.2 MONOKLONALE ANTIKOERPER 33
METHODEN 35
3.1 ANREICHERUNG DER NK-ZELLEN 35
3.1.1 ISOLIERUNG PERIPHERER MONONUKLEARER ZELLEN 35
3.1.2 IMMUNMAGNETISCHE ANREICHERUNG CD56
+
-ZELLEN 36
3.1.3 IMMUNMAGNETISCHE T-ZELL-DEPLETION MIT CD3-DYNABEADS 38
3.1.4 ZELLZAEHLUNG UND MIKROSKOPIE 39
3.2 ZYTOTOXIZITAETSTEST 40
3.2.1 HINTERGRUND 40
3.2.2 DURCHFUEHRUNG 41
3.3 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 44
3.3.1 HINTERGRUND 44
3.3.2 DURCHFUEHRUNG 46
3.4 QUANTITATIVE DURCHFLUSSZYTOMETRIE 48
3.4.1 HINTERGRUND 48
3.4.2 DURCHFUEHRUNG 50
3.5 ZELLKULTUR 52
3.6 HLA-TYPISIERUNGEN UND KIR-LIGAND-STATUS 52
3.7 KIR-GENOTYPISIERUNG DER NK-ZELL SPENDER 53
3.8 DATENAUSWERTUNG, SPEICHERUNG, STATISTISCHE AUSWERTUNG 53
ERGEBNISSE 54
4.1 ZYTOTOXIZITAETSTESTS IM KONTEXT DES KIR-LIGAND-MODELLS RESPEKTIVE DES
KIR-GENOTYP-MODELLS 54
4.1.1 ZYTOTOXISCHE AKTIVITAET ANGEREICHERTER NK-ZELLEN GEGENUEBER DER
ZELLLINIE K562 56
VI
4.1.2 ZYTOTOXISCHE AKTIVITAET ANGEREICHERTER NK-ZELLEN GEGENUEBER AML-
BLASTEN 57
4.1.3 DER EINFLUSS EINES KIR-LIGAND-MISMATCHES AUF DIE ZYTOTOXISCHE
AKTIVITAET ANGEREICHERTER NK-ZELLEN GEGENUEBER AML-BLASTEN 61
4.2 QUANTITATIVE HLA-KLASSE-I-BESTIMMUNG 69
4.2.1 QUANTITATIVE HLA-A, -B UND -C-BESTIMMUNG 69
4.2.2 EINFLUSS DER HLA-A, -B UND -C-EXPRESSION AUF DIE NK-ZELL-
EMPFINDLICHKEIT 70
4.2.3 QUANTITATIVE HLA-E-BESTIMMUNG 72
4.2.4 EINFLUSS DER HLA-E-EXPRESSION AUF DIE NK-ZELL-EMPFINDLICHKEIT...
72
4.3 QUANTITATIVE CD33-BESTIMMUNG 73
4.3.1 EINFLUSS DER CD33-EXPRESSION AUF DIE NK-ZELL-EMPFINDLICHKEIT....
73
4.4 UNTERSUCHUNGEN ZUR EXPRESSION VON NKG2D-AKTIVIERENDEN LIGANDEN,
VON LIGANDEN FUER WEITERE KO-REZEPTOREN BEZIEHUNGSWEISE NON-MHC-
SPEZIFISCHE REZEPTOREN UND ADHAESIONSMOLEKUELEN 74
4.4.1 UNTERSUCHUNGEN ZUR EXPRESSION VON NKG2D-AKTIVIERENDEN
LIGANDEN 74
4.4.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR EXPRESSION VON LIGANDEN FUER WEITERE KO-
REZEPTOREN BEZIEHUNGSWEISE NON-MHC-SPEZIFISCHE REZEPTOREN UND ZUR
EXPRESSION VON ADHAESIONSMOLEKUELEN 76
4.4.3 EINFLUSS DER EXPRESSION VON NKG2D-AKTIVIERENDEN LIGANDEN, VON
LIGANDEN FUER WEITERE KO-REZEPTOREN BEZIEHUNGSWEISE NON-MHC-
SPEZIFISCHE REZEPTOREN UND ADHAESIONSMOLEKUELEN AUF DIE NK-ZELL-
EMPFINDLICHKEIT DER BLASTEN 78
J DISKUSSION 88
5.1 METHODENKRITIK 88
5.1.1 ANREICHERUNG DER CD56
+
-ZELLEN MIT DEM MACS-SYSTEM UND
T-ZELL-DEPLETION MIT DYNABEADS 88
5.1.2 ZYTOTOXIZITAETSTEST 88
5.1.3 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 89
VII
5.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR ZYTOTOXISCHEN AKTIVITAET DER ANGEREICHERTEN NK-
ZELLEN IM KONTEXT DES KIR-LIGAND-MODELLS RESPEKTIVE DES KIR-GENOTYP-
MODELLS 90
5.2.1 EINFLUSS DES KIR-LIGAND-MISMATCHES AUF DIE NK-ZELL-AKTIVITAET 90
5.2.2 EINFLUSS DER KIR-GENOTYPEN AUF DIE NK-ZELL-AKTIVITAET 93
5.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR EXPRESSION VON HLA-KLASSE-I-MOLEKUELEN AUF
AML-BLASTEN UND ZU DEM DARAUS RESULTIERENDEN EINFLUSS AUF DIE NK-ZELL-
EMPFINDLICHKEIT DER BLASTEN 94
5.3.1 EINFLUSS DER EXPRESSION VON HLA-A, -B UND -C AUF AML-BLASTEN AUF
DEREN NK-ZELL-EMPFINDLICHKEIT 94
5.3.2 EINFLUSS DER EXPRESSION VON HLA-E AUF AML-BLASTEN AUF DEREN NK-
ZELL-EMPFINDLICHKEIT 96
5.4 EXPRESSION VON CD33 AUF AML-BLASTEN 97
5.5 UNTERSUCHUNGEN ZUR EXPRESSION VON LIGANDEN FUER KO-REZEPTOREN
BEZIEHUNGSWEISE NON-MHC-SPEZIFISCHE REZEPTOREN UND VON
ADHAESIONSMOLEKUELEN AUF AML-BLASTEN UND ZU DEM DARAUS RESULTIERENDEN
EINFLUSS AUF DIE NK-ZELL-EMPFINDLICHKEIT DER BLASTEN 99
5.5.1 DER KO-REZEPTOR 2B4 UND SEIN LIGAND CD48 99
5.5.2 DER KO-REZEPTOR DNAM-1 UND SEINE LIGANDEN CD155 (PVR) UND
CD112 (NECTIN-2) 101
5.5.3 DER KO-REZEPTOR NKG2D UND SEINE LIGANDEN ULBP1-4 UND
MICA/B 102
5.5.4 DER KO-REZEPTOR CD2 UND SEIN LIGAND CD58 103
5.5.5 DAS ADHAESIONSMOLEKUEL LFA-1 (CD11A/CD18) UND SEINE LIGANDEN
ICAM-1 (CD54), ICAM-2 (CD102) UND ICAM-3 (CD 50) 103
5.5.6 EINFLUSS DES FAS-LIGANDEN (CD95) UND DES
FAS/FASL-MECHANISMUS 107
5.5.7 ZUSAMMENFASSUNG 108
5.6 SCHLUSSFOLGERUNGEN FUER DIE KLINISCHE ANWENDUNG 109
6 ZUSAMMENFASSUNG 113
7 LITERATURVERZEICHNIS 115
VIII
8 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 128
9 TABELLENVERZEICHNIS 131
10 DANKSAGUNG 134
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