Die Rolle von Kollagen IX in der Zell-Matrix-Interaktion von Knorpelzellen

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser: Bonk, Melanie 1986- (VerfasserIn)
Format: Abschlussarbeit Buch
Sprache:German
Veröffentlicht: 2014
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adam_text INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS I ABBILDUNGSVERZEICHNIS IV T ABELLEN VERZEICHNIS V ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VI KAPITEL 1 EINLEITUNG 1 1.1 KNORPELGEWEBE 1 1.1.1 AUFBAU: DAS CHONDRON ALS FUNKTIONELLE EINHEIT DES KNORPELGEWEBES 1 1.1.2 DER HYALINE KNORPEL 3 1.2 DIE WACHSTUMSFUGE 4 1.2.1 DIE ENTSTEHUNG DER EPIPHYSENFUGE - EIN TEMPORAERES RELIKT CHONDRALER OSSIFIKATION 4 1.2.2 CHONDROZYTENDIFFERENZIERUNG IN DER WACHSTUMSFUGE 7 1.2.2.1 RUHEZONE - ZONA RESERVATA 9 1.2.2.2 PROLIFERATIONSZONE - ZONAPROLIFERATIVA 9 1.2.2.3 HYPERTROPHE ZONE - ZONA HYPERTROPHICA 10 1.2.2.4 EROEFFNUNGS- (ZONA RESORBENS) UND VERKNOECHERUNGSZONE {ZONA OSSIFICATIONIS) 10 1.3 DIE EXTRAZELLULAERE MATRIX (ECM) DES HYALINEN KNORPELS 11 1.3.1 DIE PROTEINFAMILIE DER KOLLAGENE 12 1.3.1.1 DIE KOLLAGENE II UND XI ALS VERTRETER DER FIBRILLAEREN KOLLAGENE 14 1.3.1.2 KOLLAGEN IX ALS VERTRETER DER FACIT-KOLLAGENE 17 1.4 ZELL-MATRIX-ADHAESION 20 1.4.1 INTEGRINE 20 1.4.1.1 FOKALE ADHAESIONEN 24 1.4.1.2 DIE KOLLAGEN-BINDENDEN INTEGRINE AISSI, A 2 SSI, A :0 SSI UND ANSSI 25 1.4.2 DISCOIDIN DOMAENE-REZEPTOREN 27 1.5 EMBRYONALES HUEHNERSTERNUM 29 1.6 ZIEL DER ARBEIT 30 KAPITEL 2 MATERIAL UND METHODEN 33 2.1 MATERIAL 33 2.1.1 V ERBRAUCHSMATERIALIEN 33 2.1.2 REAGENZIEN 34 2.1.3 GERAETE 35 2.1.4 PUFFER UND LOESUNGEN 36 2.1.5 ENZYME 36 2.1.6 ZELLEN 37 2.2 METHODEN 38 2.2.1 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 38 2.2.1.1 PRAEPARATION VON STERNA AUS HUEHNEREMBRYONEN 38 2.2.1.2 ISOLIERUNG VON CHONDROZYTEN AUS HUEHNERSTERNA 38 2.2.1.3 ZELLZAHLBESTIMMUNG 39 HTTP://D-NB.INFO/1054342369 2.2.1.4 KULTIVIERUNG PRIMAERER CHONDROZYTEN IN AGAROSE 40 2.2.1.4.1 VORBEREITUNG DER BESCHICHTETEN SCHALEN 40 2.2.1.4.2 HERSTELLUNG DER AGAROSE-SUSPENSIONSKULTUR 40 2.2.1.4.3 KULTIVIERUNG DER ZELLEN 40 2.2.1.4.4 AUFBEWAHRUNG DER KULTUREN BIS ZUR KOLLAGENISOLATION 41 2.2.1.5 ADHAESIONSASSQY 42 2.2.1.5.1 BESCHICHTUNG VON 96-WE//-ZELLKULTURPLATTEN MIT PROTEINEN DER ECM 42 2.2.1.5.2 IN VITRO FIBRILLOGENESE 43 2.2.1.5.3 WASCHEN UND BLOCKIEREN 43 2.2.1.5.4 ZELLAUSSAAT UND -ADHAESION 44 2.2.1.5.5 AUSWERTUNG 44 2.2.1.6 KOLORIMETRISCHE MESSUNG DER ZELLDICHTE ANHAND VON KRISTALLVIOLETT 45 2.2.1.7 ZELLZAEHLUNG 46 2.2.2 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 48 2.2.2.1 ETHANOLFALLUNG VON PROTEINEN 48 2.2.2.2 PROBENVORBEREITUNG FUER DIE SDS-PAGE 48 2.2.2.3 SDS-GELELEKTROPHORESE 49 2.2.2.4 COOMASSIE-FAERBUNG VON SDS-GELEN 51 2.2.2.5 ISOLIERUNG TERNAERER KOLLAGENE AUS AGAROSE-CHONDROZYTEN-SUSPENSIONSKULTUREN 52 2.2.2.6 AUFREINIGUNG TERNAERER KOLLAGENE 53 2.2.2.7 DIALYSIEREN VON KOLLAGENEN 56 2.2.3 MIKROSKOPISCHE METHODEN 57 2.2.3.1 PHASENKONTRASTMIKROSKOPIE 57 2.2.3.2 TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE 57 2.2.4 GRAFIKPROGRAMME UND STATISTISCHE AUSWERTUNG 58 KAPITEL 3 ERGEBNISSE 59 3.1 KONZEPT ZUR ENTWICKLUNG DES ADHAESIONSASSAYS 60 3.2 DIE AUSWAHL EINER GEEIGNETEN MIKROTITERPLATTE: NUNC CELLSTAR, SENSOPLATE* UND NUNC MAXISORP IM TEST 61 3.2.1 NUNC CELLSTARFLAT-BOTTOM 96 WELLPLATE 61 3.2.2 SENSOPLATE* 96 WELLGLASS-BOTTOM PLATE 62 3.2.3 NUNC MAXISORP FLAT-BOTTOM 96 WELL PLATE 62 3.3 DIE KONTROLLE DER KOLLAGENBESCHICHTUNG 63 3.4 DIE QUANTITATIVE ERFASSUNG ADHAERENTER KNORPELZELLEN: ZELLZAEHLUNG VS. KRISTALLVIOLETT-FAERBUNG 69 3.4.1 DIE METHODE DER ZELLZAEHLUNG IST VERLAESSLICH REPRODUZIERBAR 70 3.4.2 DIE COLORIMETRISCHE MESSUNG DER ZELLDICHTE MIT KRISTALLVIOLETT 79 3.5 GESAMTUEBERBLICK UEBER DIE VERSUCHSERGEBNISSE DER VERSCHIEDENEN PLATTENSYSTEME 84 3.6 DER UNMITTELBARE EINFLUSS VON KOLLAGEN IX AUF DIE ZELLADHAESION ERWEIST SICH ALS NICHT STATISTISCH SIGNIFIKANT 85 3.6.1 UNTER EINSATZ VON STORAGE PUFFER 85 3.6.2 UNTER EINSATZ VON HEPES PUFFER 90 KAPITEL 4 DISKUSSION 98 4.1 DIE ENTWICKLUNG DES TESTSYSTEMS MIT INTERPRETATION DER GEWONNENEN RESULTATE 98 INHALTSVERZEICHNIS III 4.2 DER EINFLUSS VON KOLLAGEN IX AUF DIE ZELLADHAESION- CHONDROZYTEN UND IHRE REZEPTOREN 99 4.3 DIE KOLLAGEN X-KNOCKOUTM2U1S WEIST EINE VERAENDERTE KOMPOSITION DER ECM AUF - INWIEWEIT NEHMEN KOLLAGEN IX-INTERAKTOME EINFLUSS AUF DIE ZELLADHAESION? 104 4.4 BEVORZUGEN CHONDROZYTEN MONOMERE GEGENUEBER FIBRILLEN FUER IHRE ADHAESION?.... 111 4.5 AUSBLICK 114 ZUSAMMENFASSUNG 115 LITERATURVERZEICHNIS 117 DANKSAGUNG 127 LEBENSLAUF 128
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