Entzündliche Faktoren und Blutplättchen im experimentellen myokardialen ischämischen Schaden
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| adam_text | ENTZUENDLICHE FAKTOREN UND BLUTPLAETTCHEN IM EXPERIMENTELLEN
MYOKARDIALEN ISCHAEMISCHEN SCHADEN
***
INFLAMMATORY FACTORS AND BLOOD PLATELETS IN EXPERIMENTAL
MYOCARDIAL ISCHEMIC INJURY
DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES NATURWISSENSCHAFTLICHEN DOKTORGRADES
DER GRADUATE SCHOOL OF LIFE SCIENCES,
JULIUS-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET WUERZBURG,
KLASSE BIOMEDIZIN
VORGELEGT VON
CHRISTINA ELISABETH PACHEL
AUS
LUDWIGSHAFEN AM RHEIN
WUERZBURG, 2014
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INHALTSVERZEICHNIS
1. ZUSAMMENFASSUNG 1
2. SUMMARY 3
3. EINLEITUNG 6
3.1. DER MYOKARDINFARKT 6
3.1.1. URSACHEN UND PATHOGENESE DES MYOKARDINFARKTS 6
3.1.2. ISCHAEMIE-REPERFUSION (IR) UND REPERFUSIONSSCHAEDEN 8
3.1.3. WUNDHEILUNG UND MYOKARDIALES REMODELLING 9
3.1.4. IMMUNSYSTEM UND WUNDHEILUNG NACH MYOKARDINFARKT 11
3.2. TUMOR NECROSIS FACTOR-LIKE WEAK INDUCER OF APOPTOSIS (TWEAK) 13
3.2.1. TWEAK IN ISCHAEMISCHEN ERKRANKUNGEN 14
3.2.2. AKTIVIERUNG DES NUCLEAR FACTOR KAPPA B-SIGNALWEGS DURCH TWEAK 16
3.3. BLUTPLAETTCHENPROTEINE ALS ZIELSTRUKTUREN IM MYOKARDINFARKT 18
3.3.1. BLUTPLAETTCHEN UND HAEMOSTASE 18
3.3.2. BLUTPLAETTCHENHEMMUNG NACH MYOKARDINFARKT 21
3.3.3. DAS GLYKOPROTEIN GPIB 21
3.3.4. DAS GLYKOPROTEIN GPVI 22
3.3.5. STIM1 UND ORAIL 23
4. PROBLEMSTELLUNG 25
5. MATERIAL 26
5.1. CHEMIKALIEN- UND REAGENZIENLISTE 26
5.2. KITS, ARRAYS UND ELISA 28
5.3. PRIMAERANTIKOERPER UND PROTEINE 29
5.4. SEKUNDAERANTIKOERPER 30
5.5. QRT-PCR TAQMAN-SONDEN 30
5.6. PUFFER UND MEDIUM 30
5.7. EUKARYOTISCHE ZELLEN 31
5.8. LOESUNGEN UND PUFFER 31
5.9. GERAETE UND ZUBEHOER 34
6. METHODEN 35
6.1. IN VIVO EXPERIMENTE 35
6.1.1. VERSUCHSTIERE 35
6.1.2. ISCHAEMIE-REPERFUSIONSMODELL UND EXPERIMENTELLER MYOKARDINFARKT 35
6.1.3. BEHANDLUNGSSCHEMA 36
6.1.4. ECHOKARDIOGRAPHIE 37
6.1.5. BESTIMMUNG VON KARDIALEN RUPTUREN 37
6.1.6. ORGANENTNAHME 38
6.2. HISTOLOGIE 39
6.2.1. PRAEPARATION DES HISTOLOGISCHEN MATERIALS 39
6.2.2. INFARKTGROESSENBESTIMMUNG MIT PIKRO-SIRIUSROT 40
6.3. IMMUNHISTOLOGIE 40
6.4. ELISA VON TWEAK IM BLUTSERUM 42
6.5. RNA ISOLATION AUS MAUSGEWEBE 43
6.6. RNA-QUANTIFIZIERUNG UND -INTEGRITAETSBESTIMMUNG 44
6.7. QRT-PCR 45
6.8. INFARKTGROESSENBESTIMMUNG MIT EVANS BLUE/TTC-FAERBUNG 46
6.9. MIKROZIRKULATIONSMESSUNG 47
6.10. GELATINE ZYMOGRAPHIE 48
6.11. ZYTOKIN PROTEIN ARRAY 49
6.12. BIOINFORMATISCHE ANALYSE DES ZYTOKIN PROTEIN ARRAYS 50
6.13. DURCHFLUSSZYTOMETRIE VON GEWEBSLEUKOZYTEN 50
6.14. DEPLETION VON NEUTROPHILEN 51
6.15. IN VITRO EXPERIMENTE 52
6.15.1. ZELLLINIEN 52
6.15.2. ISOLATION VON PRIMAEREN KARDIALEN MAUSFIBROBLASTEN 52
6.15.3. ISOLATION VON PRIMAEREN KARDIALEN MAUSMYOZYTEN 52
6.15.4. ZELLVITALITAETSBESTIMMUNG 53
6.15.5. DURCHFLUSSZYTOMETRIE VON ZELLEN 54
6.15.6. TWEAK-GAUSSIA-BINDUNGSASSAY MIT HUMANEN KARDIALEN FIBROBLASTEN
54
6.15.7. WESTERN BLOT ANALYSE 55
6.15.8. MTT ZELLVITALITAETSTEST 56
6.15.9. KRISTALLVIOLETT TEST 56
6.16. STATISTISCHE ANALYSE 57
7. ERGEBNISSE 58
7.1. TWEAK UND FN14 IM MYOKARDINFARKT 58
7.1.1. EXPRESSION VON TWEAK UND FN14 NACH MYOKARDINFARKT 58
7.1.2. FUNKTIONALITAET DES FN14-SIGNALWEGES IN HUMANEN KARDIALEN
FIBROBLASTEN 60
7.1.3. EFFEKTE VON HSA-FLAG-TWEAK AUF DAS UEBERLEBEN NACH MYOKARDINFARKT
63
7.1.4. EFFEKTE VON HSA-FLAG-TWEAK AUF DIE EXTRAZELLULAERE MATRIX 65
7.1.5. EFFEKTE VON HSA-FLAG-TWEAK AUF DIE IMMUNREAKTION NACH
MYOKARDINFARKT 68
7.1.6. NEUTROPHILE UND KARDIALE RUPTUREN 72
7.2. BLUTPLAETTCHENHEMMUNG IM MYOKARDIALEN IR-SCHADEN 74
7.2.1. EFFEKTE VON ANTI-GPIB/-GPVI-ANTIKOERPERN UND STIM1/ORAI1 KO IM
IR-MODELL 74
7.2.2. WIRKUNGEN EINER GPVI-HEMMUNG AUF DIE MIKROZIRKULATION 75
7.2.3. EFFEKTE VON ANTI-GPIB-/ANTI-GPVI-ANTIKOERPERN AUF DIE INFLAMMATION
NACH IR 77
8. DISKUSSION 81
8.1. DAS TWEAK-FN14-SYSTEM IM MYOKARDINFARKT 81
8.2. BLUTPLAETTCHEN ALS THERAPEUTISCHE ZIELSTRUKTUREN IM MODELL DER IR 86
8.3. AUSBLICK 89
9. LITERATURVERZEICHNIS 91
10. ANHANG 103
10.1. ABKUERZUNGEN 103
10.2. PUBLIKATIONSLISTE 107
10.3. LEBENSLAUF 108
10.4. EIDESSTATTLICHE ERKLAERUNG 109
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