In vitro-Evaluation von rekombinanten E.coli Shigatoxoiden als Impfstoffkandidaten für Rinder

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1. Verfasser: Kerner, Katharina (VerfasserIn)
Format: Abschlussarbeit Buch
Sprache:German
Veröffentlicht: Gießen, Lahn VVB Laufersweiler Verlag 2012
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adam_text IMAGE 1 I I N H A L T I INHALT I INHALT I II A B K UE R Z U N G S V E R Z E I C H N I S 1 III EINLEITUNG 4 IV LITERATURUEBERSICHT 6 1 SHIGATOXIN 6 1.1 V E R B R E I T U N G U N D P A T H O G E N I T AE T S H I G A T O X I N - B I L D E N D E R E S C H E R I C H I A C O L I 6 1.2 S T R U K T U R D E S T O X I N S 8 1.3 S T X - R E Z E P T O R E N 9 1.4 M E C H A N I S M E N D E R S T X - W I R K U N G A U F Z E L L E N U N D Z E L L U L AE R E R E A K T I O N E N 9 1.5 W I R K U N G M U T A G E N I S I E R T E R S H I G A T O X I N E 12 1.6 B E D E U T U N G D E S S T X F UE R D I E P A T H O G E N E S E E H E C - B E D I N G T E R E R K R A N K U N G E N 13 1.7 S T X - W I R K U N G A U F Z E L L E N D E S I M M U N S Y S T E M S 14 1.8 V E R L A U F E I N E R I N F E K T I O N M I T S T E C B E I M R I N D 16 2 OPTIONEN ZUR BEHANDLUNG UND PRAEVENTION EHEC-BEDINGTER ERKRANKUNGEN 16 2.1 B E H A N D L U N G E H E C - I N F I Z I E R T E R M E N S C H E N 16 2.2 S U B U N I T - V A K Z I N E U N D T O X O I D - V A K Z I N E 18 2.3 K A N D I D A T E N A N T I G E N E F UE R E I N E I M P F U N G Z U R V E R R I N G E R U N G D E R S T E C - A U S S C H E I D U N G B E I M R I N D 19 3 ZIEL DIESER ARBEIT 23 V MATERIAL U N D M E T H O D E N 2 4 I. I A M P L I F I K A T I O N D E R S T X L - U N D ,S7;*:2-GENSEQUENZEN 2 4 1.2 K L O N I E R U N G D E R A M P L I F I Z I E R T E N T O X I N G E N E 2 7 1.3 S E Q U E N Z I E R U N G 2 9 L .4 M U T A G E N I S I E R U N G D E R K L O N I E R T E N T O X I N G E N E 2 9 1.5 A G A R O S E G E L E L E K T R O P H O R E S E 31 1.6 E X P R E S S I O N D E R M U T I E R T E N T O X I N G E N E 31 1.7 D E T O X I - G E I * E N D O T O X I N R E M O V I N G G E L 3 2 2 VEROZELL-ZYTOTOXIZITAETSTEST 33 2.1 Z E L L L I N I E 3 3 2.2 D U R C H F U H R U N G 3 3 2.3 A U S W E R T U N G 3 4 I HTTP://D-NB.INFO/1024745732 IMAGE 2 I I N H A L T 3 ELISA 3 8 3.1 D U R C H F U H R U N G D E S S T X - E L I S A 3 8 3 . 2 D U R C H F UE H R U N G D E S K O M P E T I T I V E N E L I S A 3 8 4 BERECHNUNG DER S T A M M L OE S U N G DER TOXINPRAEPARATIONEN 3 9 5 MONONUKLEAERE ZELLEN AUS D E M PERIPHEREM BLUT ( P B M C ) 4 0 5.1 I S O L A T I O N 4 0 5.2 I N K U B A T I O N M I T D E N T O X I N P R AE P A R A T I O N E N 4 1 5.3 I M M U N D E K O R A T I O N 4 1 5 . 4 A N A L Y S E S T R A T E G I E I M D U R C H F L U S S Z Y T O M E T E R 4 3 6 LLEALE INTRAEPITHELIALE LYMPHOZYTEN (ILEL) 4 5 6.1 I S O L A T I O N 4 5 6 . 2 I M M U N D E K O R A T I O N U N D A N A L Y S E I M D U R C H F L U S S Z Y T O M E T E R 4 6 6.3 I N K U B A T I O N M I T D E N T O X I N P R AE P A R A T I O N E N 4 7 6 . 4 Z E L L E R N T E F UE R R N A - G E W I N N U N G 4 7 6 . 5 R N A - G E W I N N U N G 4 7 7 MAKROPHAGEN 5 6 7.1 I S O L A T I O N D E R P E R I P H E R E N M O N O N U K L E AE R E N Z E L L F R A K T I O N 5 6 7.2 G E N E R I E R U N G E I N E R M A K R O P H A G E N K U L T U R 5 7 7.3 I N K U B A T I O N M I T D E N T O X I N P R AE P A R A T I O N E N 5 8 7 . 4 I M M U N D E K O R A T I O N 5 8 7.5 A N A L Y S E S T R A T E G I E I M D U R C H F L U S S Z Y T O M E T E R 5 8 7 . 6 R N A - G E W I N N U N G 5 9 8 STATISTISCHE AUSWERTUNG 6 0 V I ERGEBNISSE 61 1 HERSTELLUNG DER MUTAGENISIERTEN S T X L - UND S*2-GENE 61 2 HERSTELLUNG VON TOXINPRAEPARATIONEN ALS STAMMLOESUNGEN 61 2.1 Z Y T O T O X I Z I T AE T D E R A U S D E N S T X - T R A N S F O R M A N T E N G E W O N N E N E N F R A K T I O N E N 6 2 2 . 2 E I G E N S C H A F T E N D E R T O X I N P R AE P A R A T I O N E N 6 4 3 W I R K U N G DES RSTXWR U N D DES RSTX MU, A U F BOVINE P B M C 6 5 3.1 V I T A L I T AE T 6 7 3 . 2 A N T E I L U N D V I T A L I T AE T V O N P B M C - S U B P O P U L A T I O N E N 6 8 3.3 S T X - R E Z E P T O R G B 3 / C D 7 7 7 1 4 W I R K U N G VON RSTXWI UND RSTX MU, A U F BOVINE I L E L 75 II IMAGE 3 I 5 WIRKUNG VON RSTXWR UND RSTX MUT A U F BOVINE MAKROPHAGEN 7 6 5.1 VITALITAET 7 6 5.2 O B E R F L AE C H E N M A R K E R 7 7 5.3 T R A N S K R I P T I O N S R A T E V O N V E R S C H I E D E N E N Z Y T O K I N E N / C H E M O K I N E N 8 0 6 UEBERPRUEFUNG DER ANTIGENITAET VON RSTXWR UND RSTX MUT 8 2 V I I D I S K U S S I O N 8 3 1.1 H E R S T E L L U N G D E R T O X I N E U N D T O X O I D E 8 3 1.2 W I R K U N G D E R T O X I N E U N D T O X O I D E A U F P B M C 8 5 1.3 W I R K U N G D E R T O X I N E U N D T O X O I D E A U F I N T R A E P I T H E L I A L E L Y M P H O Z Y T E N D E S I L E U M S 8 9 1.4 W I R K U N G D E R T O X I N E U N D T O X O I D E A U F M A K R O P H A G E N 9 0 1.5 A N T I G E N I T AE T U N D I M M U N O G E N I T AE T D E R T O X I N E U N D T O X O I D E 9 2 1.6 M OE G L I C H E R E I N S A T Z D E R S H I G A T O X O I D E FUER I M P F U N G E N IN R I N D E R B E S T AE N D E N 9 3 1.7 S C H L U S S F O L G E R U N G 9 7 VIII Z U S A M M E N F A S S U N G 9 8 I X S U M M A R Y 9 9 X LITERATURVERZEICHNIS 1 0 0 XI A N H A N G 112 1 UEBERSICHT UEBER BLUTSPENDERTIERE 112 2 UEBERSICHT UEBER VERWENDETE SEREN 112 3 UEBERSICHT UEBER VERWENDETE GERAETE, CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 113 4 VERWENDETE PUFFER UND MEDIEN 119 4.1 P U F F E R , L OE S U N G E N U N D M E D I E N FUER Z E L L K U L T U R T E C H N I K E N 119 4.2 P U F F E R F UE R D E N E L I S A 122 4 . 3 P U F F E R U N D L OE S U N G E N FUER P C R S 123 X I I ABBILDUNGSVERZEICHNIS 124 1 ABBILDUNGEN 124 2 TABELLEN 125 XIII D A N K S A G U N G 127 III
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