Beteiligung von Ionenkanälen an der Regulation der Phagozytose des Retinalen Pigmentepithels
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VII
ZUSAMMENFASSUNG 11
1. EINLEITUNG 13
1.1 AUFBAU UND FUNKTION DER RETINA 13
1.1.1 RETINA 13
1.1.2 RPE 14
1.2 PHAGOZYTOSE DES RPE 16
1.2.1 PHAGOZYTOSEREZEPTOREN 17
1.2.2 SIGNALWEGE 19
1.3 ERKRANKUNGEN DES RPE MIT MOEGLICHER PHAGOZYTOSE BETEILIGUNG 21
1.3.1 USHER SYNDROM 21
1.3.2 BEST SCHE VITELLIFORME MAKULADYSTROPHIE 22
1.4. BESTROPHIN-1 24
1.5 CA 2+UND ZELLFUNKTIONEN DES RPE 27
1.6 CA 2* KANAELE DES RPE 28
1.6.1 SPANNUNGSABHAENGIGE CA 2* KANAELE 28
1.6.2 ORAI-1 UNDSOCE 29
1.6.3 TRP KANAELE 31
1.6.4 ATP REZEPTOREN 32
1.7 K +KANAELE DES RPE 32
1.7.1 BK KANAELE 32
1.8 ZIELSETZUNG 34
2. MATERIAL UND METHODEN 35
IV
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
2.1 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 35
2.2 VERWENDETE GERAETE 35
2.3 MAUSLINIEN 37
2.4 ZELLKULTUR 37
2.4.1 GEWINNUNG UND KULTUR PRIMAERER MURINER RPE ZELLEN 37
2.4.2 GEWINNUNG UND KULTUR PRIMAERER PORCINER RPE ZELLEN 38
2.5 SIRNA TRANSFEKTION DER PRIMAEREN PORCINEN RPE ZELLEN 38
2.6 ISOLIERUNG VON PHOTOREZEPTORAUSSENSEGMENTEN (OS) 39
2.6.1 PRAEPARATION DER RETINAE 40
2.6.2 HOMOGENISATION UND DICHTEGRADIENTENULTRAZENTRIFUGATION 40
2.7 MESSUNG DER PHAGOZYTOSE PORCINER RPE ZELLEN 42
2.7.1 FLUORESZENZMARKIERUNG DER OS 42
2.7.2 PHAGOZYTOSE IN VITRO ASSAY 42
2.8 SUBZELLULAERE FRAKTIONIERUNG 42
2.9 WESTERN BLOT 43
2.10 REALTIME PCR 43
2.11 MESSUNG DES TRANSEPITHELIALEN WIDERSTANDES 44
2.12 PARAFFINSCHNITTE 45
2.12.1 GEWEBEFIXIERUNG UND -BEARBEITUNG 45
2.12.2 VORBEREITUNG FUER DIE FAERBUNG 45
2.12.3 IMMUNOHISTOLOGISCHE FAERBUNGEN 45
2.12.4 IMMUNOZYTOCHEMISCHE FAERBUNGEN 46
2.13 STATISTISCHE ANALYSE 46
3. ERGEBNISSE 48
3.1 PHAGOZYTOSE PORCINER RPE ZELLEN IN VITRO 48
3.1.1 ETABLIERUNG EINES ZELLKULTURSYSTEMS ZUR MESSUNG DER PHAGOZYTOSE,
VALIDIERUNG DER METHODE 48
V
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.2 EXPRESSION VON CA V1.3 CA 2* KANAELEN, BESTROPHIN-1 UND BK K+
KANAELEN IN
PORCINEN RPE ZELLEN 51
3.1.3 BESTROPHIN-1 53
3.3 CA 2+ KANAELE 57
3.4 BETEILIGUNG VON BK KANAELEN AN DER REGULATION DER PHAGOZYTOSE 61
3.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR PHAGOZYTOSE DES RPE IM MAUSMODELL 62
3.2.1 PHAGOZYTOSE IN VIVO: UNTERSUCHUNGEN IM CA V1-3 -/- MAUSMODELL 64
3.2.2 PHAGOZYTOSE IN VIVO: UNTERSUCHUNGEN IM BK-/- MAUSMODELL 66
3.2.2.1 STRUKTURELLE VERAENDERUNGEN IN DER RETINA VON BK-/- MAEUSEN 68
3.2.2.2 UNTERSUCHUNGEN ZU LIPOFUSZINABLAGERUNGEN IM RPE VON BK-/- MAEUSEN
69
3.2.2.3 UNTERSUCHUNG DES RHODOPSINGEHALTS IN RETINAE VON BK-/- MAEUSEN 70
4. DISKUSSION 72
4.1. UNTERSUCHUNGEN ZUR BETEILIGUNG VON LONENKANAELEN AN DER REGULATION
DER PHAGOZYTOSE IN VITRO 72
4.1.1 ZELLKULTURSYSTEM ZUR MESSUNG DER PHAGOZYTOSE PRIMAERER PORCINER RPE
ZELLEN IN VITRO 72
4.1.2 EXPRESSION VON CA V1.3, BESTROPHIN-1 UND BK KANAELEN IN PORCINEN
RPE
ZELLEN 75
4.1.3 BESTROPHIN-1 77
4.1.4 CA 2* KANAELE 81
1.5 BKK +KANAELE 87
1.6 MODELL ZUR LONENKANALINTERAKTION IN DER REGULATION DER PHAGOZYTOSE
88
4.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR BETEILIGUNG VON LONENKANAELEN AN DER REGULATION
DER
PHAGOZYTOSE DES RPE IN VIVO 91
4.2.1 UNTERSUCHUNGEN IM CA V1 .3-1- UND BK-/- MAUSMODELL 92
LITERATURVERZEICHNIS 97
DANKSAGUNG 112
VI
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