Die Bedeutung der mitochondrialen Atmungskette für Proliferation, Differenzierung und Apoptose in der Epidermis
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 MITOCHONDRIEN 1
1.1.1 FUNKTION DER MITOCHONDRIEN 3
1.1.2 OXIDATIVER STOFFWECHSEL 3
1.1.3 ATMUNGSKETTE (OXIDATIVE PHOSPHORYLIERUNG) 4
1.1.4 MITOCHONDRIALE DNA (MTDNA) 5
1.1.5 MITOCHONDRIALER TRANSKRIPTIONSFAKTOR A (TFAM) 6
1.1.6 REAKTIVE SAUERSTOFFSPEZIES (ROS) 7
1.2 DIE APOPTOSE 8
1.2.1 DIE SIGNALWEGE DER APOPTOSE 9
1.2.1.1 DER MITOCHONDRIALE WEG 10
1.2.1.2 EXTRINISCHER ODER TODESREZEPTOR-SIGNALWEG 11
1.3 DIE HAUT 13
1.3.1 DIE EPIDERMIS 14
1.3.1.1 EXPRESSION SPEZIFISCHER FILAMENTPROTEINE IM RAHMEN DER
DIFFERENZIERUNG DER EPIDERMIS
1.3.1.2 ENERGIESTOFFWECHSEL DER EPIDERMIS 18
1.4 DIE KNOCKOUTMAUS ALS TIERMODELL 18
1.4.1 HERSTELLUNG EINER KNOCKOUTMAUS 18
1.5 ZIEL UND FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 21
2 MATERIAL UND METHODEN 22
2.1 GERAETE 2 2
2.2 MATERIALIEN 23
2.2.1 VERBRAUCHSMATERIALIEN 23
2.2.2 CHEMIKALIEN 24
2.2.3 LOESUNGEN UND PUFFER 24
2.2.4 MATERIAL FUER MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITEN 25
2.2.4.1 KIT 25
2.2.4.2 ENZYME UND MARKER 25
2.2.4.3 NUKLEINSAEUREN 25
2.2.4.4 OLIGONUKLEOTIDE 26
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
2.3 MATERIAL FUER HISTOLOGISCHE ARBEITEN 27
2.3.1 ALLGEMEINE CHEMIKALIEN 27
2.3.2 PUFFER, ENZYME UND SUBSTRAT 27
2.3.3 TUNEL-KIT 27
2.3.4 PRIMAERANTIKOERPER 28
2.3.5 SEKUNDAERANTIKOERPER 28
2.4 ALLGEMEINE METHODEN 29
2.4.1 MAUSZUCHT 29
2.4.2 HERSTELLUNG DER K14-TFAM-KNOCKOUT-MAUSLINIE 31
2.4.3 DAS KREUZUNGSSCHEMA 32
2.4.4 GENOTYPISIERUNG DER MAEUSE 32
2.4.4.1 DNA-EXTRAKTION AUS MAEUSESCHWAENZEN 32
2.4.4.2 PHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON DNA 32
2.4.4.3 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION 33
2.4.5 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION MIT GENOMISCHER DNA 35
2.4.6 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 35
2.5 HERSTELLUNG VON HAUTSCHNITTEN 37
2.5.1 PRAEPARATION DER MAUSHAUT FUER PARAFFIN-UND KRYOSCHNITTE 37
2.5.2 ANFERTIGEN VON PARAFFIN-GEWEBESCHNITTEN 38
2.5.3 FIXIERUNG UND EINBETTUNG DER MAUSHAUT 38
2.5.4 ANFERTIGEN VON PARAFFINSCHNITTEN
2.6 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN
2.6.1 HE-FAERBUNG
2.6.2 IMMUNHISTOCHEMISCHE VERFAHREN
2.6.2.1 DAS STRAPTAVIDIN-BIOTIN-SYSTEM
2.6.2.2 HITZE-INDUZIERTES EPITOP-RETRIEVAL
2.6.2.3 DARSTELLUNG VON COX-IL, K10, K14, LORICIN UND KI67 MIT DEM
STREPTAVIDIN-BIOTIN-SYSTEM
2.6.3 APOPTOSENACHWEIS MITTELS TUNEL-VERFAHREN
2.7 TRANSEPIDERMAL WATER LOSS (TEWL)
2.7.1 MESSPRINZIP DES TEWAMETERS
2.8 AUSWERTUNG
2.8.1 MIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
2.8.2 STATISTISCHE AUSWERTUNG 48
3 ERGEBNISSE 49
3.1 BEOBACHTUNGEN AN DER K14-TFAM-KNOCKOUT-
MAUSLINIE 50
3.1.1 DIE POSTPARTALE ENTWICKLUNG 50
3.1.2 NAHRUNGSAUFNAHME 51
3.1.3 ZUNGE 52
3.1.3.1 MAKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN 52
3.1.3.2 MIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN 53
3.1.4 TRANSEPIDERMALER WASSERVERLUST 55
3.2 HAUTUNTERSUCHUNGEN 56
3.2.1 UEBERPRUEFUNG DER TFAM-DELETION 56
3.2.2 ALLGEMEINE BEURTEILUNG DER EPIDERMIS 57
3.2.2.1 HAUTSTRUKTUR TAG 0 58
3.2.2.2 HAUTSTRUKTUR TAG 5 58
3.2.2.3 HAUTSTRUKTUR TAG 7 UND TAG 9 59
3.3 DIFFERENZIERUNG DER HAUT 6 1
3.3.1 DIFFERENZIERUNG DER HAUT TAG 0 61
3.3.2 DIFFERENZIERUNG DER HAUT TAG 9 62
3.4 PROLIFERATION 62
3.4.1 PROLIFERATION TAG 0 63
3.4.2 PROLIFERATION TAG 5 64
3.5 UNTERSUCHUNG DER APOPTOSE MITTELS DES TUNEL-
TESTS 66
3.5.1 APOPTOSE TAG 0 66
3.5.2 APOPTOSE TAG 5 67
3.6 PROLIFERATION UND APOPTOSE TAG 7 UND 9 68
3.6.1 TAG 7 68
3.6.1.1 PROLIFERATION 68
3.6.1.2 APOPTOSE 70
3.6.2 TAG 9 70
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
3.6.2.1 PROLIFERATION 70
3.6.2.2 APOPTOSE 71
4 DISKUSSION 72
4.1 ZIELSETZUNG UND FRAGESTELLUNG 72
4.2 NACHWEISE DES TFAM-KNOCKOUTS 72
4.3 TODESURSACHEN DER KNOCKOUTMAUS 73
4.4 AUSWIRKUNGEN DER DEFEKTEN ATMUNGSKETTE AUF DIE
EPIDERMALE BASALZELLE 7 3
4.5 AUSWIRKUNGEN DER DEFEKTEN ATMUNGSKETTE AUF DIE
DIFFERENZIERUNG DER EPIDERMIS 80
4.6 WELCHE ROLLE SPIELT TFAM HINSICHTLICH DER APOPTOSE ... 82
5 ZUSAMMENFASSUNG
6 LITERATURVERZEICHNIS
7 LEBENSLAUF
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