Enzymatische Tests für die Wasseranalytik
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München
Oldenbourg Industrieverl.
2012
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INHALT
1 EINFUEHRUNG 1
ZIELSETZUNG 1
AUSSAGEKRAFT DER DATEN 2
PRAKTISCHER EINSATZ UND KONKRETE ERFAHRUNGEN 3
MESSTECHNIK U N D BESONDERHEITEN 4
ELEKTROCHEMISCHE MESSUNGEN 4
PHOTOMETRISCHE MESSUNGEN 4
FLUORIMETRISCHE MESSUNGEN 4
BEEINFLUSSUNG DER FLUORESZENZMESSUNG 5
2 BEHANDLUNG DER PROBEN 9
PROBENAHME 9
PROBENLAGERUNG 9
PROBENVORBEREITUNG 9
3 AKTIVITAETSPARAMETER IN VIVO 11
3.1 ALLGEMEINE BERECHNUNGSFORMELN FUER ENZYMAKTIVITAETSTESTS 11
3.1.1 ALLGEMEINE BERECHNUNGSFORMELN FUER PHOTOMETRISCHE TESTS 11
3.1.2 ALLGEMEINE BERECHNUNGSFORMEL FUER FLUORIMETRISCHE TESTS 15
3.2 TESTBESCHREIBUNGEN 19
3.2.1 ENZYMATISCHE SUMMENPARAMETER 19
3.2.1.1 BESTIMMUNG DER ESTERASEN-AKTIVITAET IN VIVO (KUEVETTENTEST,
PHOTOMETRISCHE METHODE) 2 1
3.2.1.2 BESTIMMUNG DER ESTERASEN-AKTIVITAET IN VIVO (KUEVETTENTEST,
FLUORIMETRISCHE METHODE) 2 3
3.2.1.3 BESTIMMUNG DER ESTERASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(MIKROTITERPLATTENTEST, PHOTOMETRISCHE METHODE) 2 4
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IMAGE 2
V I
3.2.1.4 BESTIMMUNG DER ESTERASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(MIKROTITERPLATTENTEST, FLUORIMETRISCHE METHODE) 2 5
3.2.1.5 BESTIMMUNG DER PHOSPHATASEN-AKTIVITAET IN VIVO (KUEVETTENTTEST,
PHOTOMETRISCHE METHODE) 2 7
3.2.1.6 BESTIMMUNG DER PHOSPHATASEN-AKTIVITAET IN VIVO (KUEVETTENTEST,
FLUORIMETRISCHE METHODE) 2 8
3.2.1.7 BESTIMMUNG DER PHOSPHATASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(MIKROTITERPLATTENTEST, PHOTOMETRISCHE METHODE) 3 0
3.2.1.8 BESTIMMUNG DER PHOSPHATASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(MIKROTITERPLATTENTEST, FLUORIMETRISCHE METHODE) 31
3.2.2 KOHLENHYDRATSTOFFWECHSEL 3 2
3.2.2.1 BESTIMMUNG DER A-AMYLASEN-AKTIVITAET IN VIVO (KUEVETTENTEST,
PHOTOMETRISCHE METHODE) 3 6
3.2.2.2 BESTIMMUNG DES CELLULOSE-ABBAUS IN VIVO (KUEVETTENTEST,
PHOTOMETRISCHE METHODE) 3 7
3.2.2.3 BESTIMMUNG DER CELLULASEN-AKTIVITAET IN VIVO (KUEVETTENTEST,
FLUORIMETRISCHE METHODE) 3 9
3.2.2.4 BESTIMMUNG DER A - UND SS-GLUCOSIDASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(KUEVETTENTEST, PHOTOMETRISCHE METHODE) 4 0
3.2.2.5 BESTIMMUNG DER A - UND SS-GLUCOSIDASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(KUEVETTENTEST, FLUORIMETRISCHE METHODE) 4 2
3.2.2.6 BESTIMMUNG DER A - UND SS-GLUCOSIDASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(MIKROTITERPLATTENTEST, PHOTOMETRISCHE METHODE) 4 4
3.2.2.7 BESTIMMUNG DER A - UND SS-GLUCOSIDASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(MIKROTITERPLATTENTEST, FLUORIMETRISCHE METHODE) 4 5
3.2.3 PROTEINSTOFFWECHSEL 4 6
3.2.3.1 BESTIMMUNG DER PROTEASEN-AKTIVITAET IN VIVO MIT CASEIN
(KUEVETTENTEST, PHOTOMETRISCHE METHODE) 4 8
3.2.3.2 BESTIMMUNG DER PROTEASEN-AKTIVITAET IN VIVO MIT CASEIN-RESORUFIN
(KUEVETTENTEST, FLUORIMETRISCHE METHODE) 4 9
3.2.3.3 BESTIMMUNG DER ALANIN-AMINOPEPTIDASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(KUEVETTENTEST, PHOTOMETRISCHE METHODE) 51
3.2.3.4 BESTIMMUNG DER ALANIN-AMINOPEPTIDASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(KUEVETTENTEST, FLUORIMETRISCHE METHODE) 5 2
3.2.3.5 BESTIMMUNG DER ALANIN-AMINOPEPTIDASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(MIKROTITERPLATTENTEST, PHOTOMETRISCHE METHODE) 5 4
3.2.3.6 BESTIMMUNG DER ALANIN-AMINOPEPTIDASEN-AKTIVITAET IN VIVO
(MIKROTITERPLATTENTEST, FLUORIMETRISCHE METHODE) 55
3.2.4 FETTSTOFFWECHSEL 5 6
3.2.4.1 BESTIMMUNG DER LIPASEN-AKTIVITAET IN VIVO (KUEVETTENTEST,
ELEKTROCHEMISCHE METHODE) 5 7
IMAGE 3
V I I
3.2.5 STICKSTOFFSTOFFWECHSEL 58
3.2.5.1 BESTIMMUNG DER NITRIFIKATIONSHEMMUNG (BECHERGLASTEST,
PHOTOMETRISCHE METHODE) 5 9
3.2.6 STOFFWECHSEL-ENDREAKTIONEN 61
3.2.6.1 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET BEIM ELEKTRONEN-TRANSPORT-SYSTEM (ETS)
IN VIVO (NADH-ABHAENGIGE DEHYDROGENASEN) (KUEVETTENTEST, PHOTOMETRISCHE
METHODE) 63
3.2.6.2 BESTIMMUNG DER KATALASE-AKTIVITAET (KUEVETTENTEST,
ELEKTROCHEMISCHE METHODE) 65
3.3 SCHADSTOFFWIRKUNGEN IM FREILAND UND IHRE BEURTEILUNG 67
3.3.1 ERMITTLUNG VON SCHADSTOFFWIRKUNGEN IM FREILAND 6 7
3.3.2 BEURTEILUNG VON SCHADSTOFFWIRKUNGEN IM FREILAND 68
3.4 PROBENVORBEHANDLUNG ZUR HEMMEFFEKTCHARAKTERISIERUNG 7 0
3.5 XENOBIOTIKA-WIRKUNG A U F BAKTERIELLE AKTIVITAETEN A M BEISPIEL DES
VANCOMYCIN-RESISTENZGENS V A N A 72
3.6 WIRKUNGSBEZOGENE ANALYSE AM BEISPIEL VON HORMONEN 74
3.6.1 STAND DER FORSCHUNG UND TECHNIK 7 4
3.6.2 WIRKUNGSBEZOGENE ANALYTIK VON OESTROGEN-WIRKENDEN SUBSTANZEN
MITTELS REZEPTORAFFINITAETS-EXTRAKTION GEKOPPELT AN L C - M S M S
(RAE/LC-MSMS) 7 6 3.6.3 AUSBLICK 7 9
4 BIOMASSE-BESTIMMUNG 81
4.1 EINFUEHRUNG 81
4.2 TESTBESCHREIBUNGEN 82
4.2.1 BESTIMMUNG DES DNA-GEHALTS (KUEVETTENTEST, PHOTOMETRISCHE METHODE)
82
4.2.2 BESTIMMUNG DES DNA-GEHALTS (KUEVETTENTEST, FLUORIMETRISCHE
METHODE). . 84 4.2.3 BESTIMMUNG DES DNA-GEHALTES (MIKROTITERPLATTENTEST,
FLUORIMETRISCHE METHODE) 87
4.2.4 QUANTIFIZIERUNG VON D N A MIT SYBR-GREEN I-METHODE
(MIKROTITERPLATTENTEST, FLUORIMETRISCHE MESSUNG) 88
4.2.5 BESTIMMUNG DER BAKTERIELLEN GESAMTZELLZAHL U N D DER
ATMUNGSAKTIVEN ZELLZAHL (MIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG) 8 9
4.2.6 ERFASSUNG LEBENDER ZELLEN MIT QUANTITATIVER P C R NACH
ELIMINIERUNG DER D N A TOTER ZELLEN MIT PROPIDIUM-MONOAZID 91
4.2.7 QUANTITATIVE POLYMERASE KETTEN REAKTION (PCR) ZUM NACHWEIS VON
BAKTERIEN 92
IMAGE 4
V I I I
5 ENZYMHEMMTESTS IN VITRO 95
5.1 EINFUEHRUNG 9 5
5.2 TESTBESCHREIBUNGEN 9 5
5.2.1 BESTIMMUNG D E R ALDEHYDDEHYDROGENASENHEMMUNG 9 5
5.2.1.1 EINLEITUNG 9 5
5.2.1.2 SPEZIFITAET 9 6
5.2.1.3 BESTIMMUNG DER ALDEHYDDEHYDROGENASENHEMMUNG (KUEVETTENTEST,
PHOTOMETRISCHE METHODE) 9 7
5.2.1.4 BESTIMMUNG DER ALDEHYDDEHYDROGENASENHEMMUNG
(MIKROTITERPLATTENTEST, FLUORIMETRISCHE METHODE) 9 8
5.2.2 BESTIMMUNG DER ACETYLCHOLIN-ESTERASENH EMMUNG 9 9
5.2.2.1 EINLEITUNG 9 9
5.2.2.2 SPEZIFITAET 101
5.2.2.3 BESTIMMUNG DER ACETYLCHOLIN-ESTERASENHEMMUNG (KUEVETTENTEST,
PHOTOMETRISCHE METHODE) 101
5.2.3 BESTIMMUNG DER UREASEHEMMUNG 106
5.2.3.1 EINLEITUNG 106
5.2.3.2 SPEZIFITAET 106
5.2.3.3 BESTIMMUNG DER UREASEHEMMUNG (BECHERGLASTEST, ELEKTROCHEMISCHE
METHODE) 107
5.2.3.4 BESTIMMUNG DER UREASEHEMMUNG IN VITRO (MIKROTITERPLATTENTEST,
PHOTOMETRISCHE METHODE) 109
6 LITERATURVERZEICHNIS 113
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